无菌医疗器械的检验.pptVIP

2.3.3 培养基灵敏度检查 取每管装量为12mL的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天； 取每管装量为9mL的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。 逐日观察结果并记录。空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。 生化检验—无菌 3. 无菌室要求 无菌医疗器械生产企业应将微生物检测作为检测工作的重点，而微生物实验室承担着灭菌验证、环境监控、产品放行等一系列重要工作，所以说无菌医疗器械生产企业拥有一个微生物实验室是十分必要的 。微生物实验室应满足无菌实验对工作环境的要求，环境洁净度10000级，无菌室操作台或超净工作台局部应符合洁净度100级单向流空气区域要求。 生化检验—无菌 无菌室分缓冲间和无菌操作室。缓冲间及操作室内均设置照明灯和紫外灯，在缓冲间内应有洗手盆、无菌衣裤放置架或挂钩等。无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流动装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台（或生物安全柜），工作台内应准备好酒精灯、打火机、镊子、剪刀、75%酒精棉等。 无菌室应在每周和每次操作前用75%(V/V)乙醇或0.1%新洁尔灭或其他适宜消毒液擦拭工作台面及可能污染的死角，开启无菌空气过滤器及紫外灯1小时。在每次操作完毕，同样使用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌应不少于半小时。 生化检验—无菌 应定期检查工作台面空气菌落数，方法如下：取直径约90mm培养皿，无菌操作注入融化的胰酪胨大豆琼脂培养基约20mL，在30℃-35℃培养48h证明无菌后，取3只培养皿在无菌室操作台或超净工作台平均位置打开上盖，暴露 30min后盖好，置30℃-35℃培养48h后取出检查。3只培养皿上生长的菌落数平均应不超过l个（100级清洁度要求）。 无菌试验过程中应检查空气中的菌落数，方法同上。在试验开始进行时打开培养皿盖，至试验结束后盖好，按照上法培养，应符合上述要求。 生化检验—无菌 无菌操作台或超净工作台洁净度应达到100级； 温度为18℃ ～ 28℃ ； 相对湿度为45% ～ 65% ； 垂直层流风速≥0.3m/s , 水平层流风速≥0.4m/s； 不同级别洁净区及洁净区之间的静压差≥5Pa, 洁净区及室外之间的静压差≥10Pa ； 粒径≥5μm的尘粒数不得存在，≥0.5μm的尘粒数≤3500个/m3； 细菌沉降菌数平均≤1cfu/皿 生化检验—无菌 4.试验前准备 培养基在移入缓冲间前应先编号，并用0.1%新洁尔灭或(V/V)酒精棉等擦拭瓶(管)外壁，然后连同其他用具(包括无菌衣、帽、口罩等) 移入缓冲间；供试品移入前，外包装须进行消毒处理。 操作人员用肥皂、自来水洗双手，关闭紫外灯，进入缓冲间，换拖鞋，再用75%(V/V)酒精棉等擦手，穿戴衣、帽、口罩。将所需物品剥掉牛皮纸，移入无菌操作室，准备进行实验。每次实验所用物品必须计划好，并有备用物。 生化检验—无菌 生化检验—细菌内毒素 细菌内毒素的概念： 细菌内毒素（Endotoxin）是革兰氏阴性菌的细胞壁成分。细菌在生存状态时不具有毒性，只有当细菌死亡，细胞壁溶解后才表现其毒性。内毒素的主要化学成分是细胞壁中的脂多糖。 生化检验—细菌内毒素 细菌内毒素的理化性质 1 耐热性：干热灭菌250℃至少1小时可完全破坏 2 滤过性：体积极小，可通过普通滤器 3 水溶性：可溶于水，生产中可用无热原水冲洗以除去热原 4 不挥发性 5 易被吸附（树脂、玻璃等） 6 易被酸碱破坏 7 易被氧化剂破坏：30%双氧水浸泡4小时，可完全破坏 生化检验—细菌内毒素 细菌内毒素的检查方法 凝胶法 光度测定法 供试品检测时，可使用其中任何一种方法 当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准 生化检验—细菌内毒素 凝胶法的优点： 科学性：有生物化学的理论基础。 准确性：是酶的分子生化反应，专属性高，重现性强。 灵敏性：鲎试剂和细菌内毒素的反应灵敏度极高，当内毒素量低到10-10g/ml浓度，它们都能起凝胶反应，至今未发现一种物质对鲎试剂的反应比细菌内毒素更灵敏。 实用性：方法快速，操作简单，无需特殊仪器设备，经济实用。 生化检验—细菌内毒素 试验前的准备 玻璃器皿均需250℃干热灭菌1小时 移液枪的枪头须是无热原的 内毒素标准品、鲎试剂、BET水均需冷藏保存 生化检验—细菌内毒素 操作注意事项： 溶解细菌内毒素标准品时须在旋涡混合器上混合15分钟 每一步稀释均须在旋涡混合器上混合30秒 37℃恒温60分钟期间应避免震动 生化检验—细菌内毒素 鲎试剂灵敏度的检查 内毒素标