睡美人转座子真核表达载体的构建及在猪胎儿成纤维细胞系中的表达.pdfVIP

Online system: http://www.j 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2013, 21(6): 684~689 DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2013.06.007 研究报告 Letter 睡美人转座子真核表达载体的构建及在猪胎儿成纤维细胞系中的 表达验证 1，2 1 1，2* 1 2 2 2 2 1 周家庆 王升智 宋成义 高波 李奎 钱丽丽 崔文涛 牟玉莲 李碧春 1扬州大学动物科学与技 学院/ 国家动物遗传育种与繁殖重点(培育)学科，扬州225009；2 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/农业部 畜禽遗传资源与利用重点开放实验室，北京100094 *通讯作者，chengyilab@ 要 睡美人(sleeping beauty, SB)是Tc1/mariner 转座子超家族的一员，为探索睡美人转座子与不同的 转座酶搭配使用及与同种转座酶不同比例搭配使用时的转座效率，本实验构建了SB 真核表达重组载体 PT2- SV40-EGFP，通过荧光显微镜和实时荧光定量PCR(qRT-PCR) 检测进行了猪胎儿成纤维细胞系 (PEFs) 转染条件优化研究。研究结果表明，不同转座酶与转座子按10∶1 混合后细胞转染效率相似，但报 告 因表达水平有较大差异，其中SB 100X 转座酶与转座子混合后细胞的表达水平最高；转座子PT2- SV40-EGFP 质粒和SB 100X 转座酶质粒按不同比例混合转染细胞研究表明，细胞转染效率相似，但表达 水平存在显著差异，其中1∶1 组最高，约是5 ∶1 组和10∶1 组的50 倍。本实验优化了睡美人转座子的转座 条件为制备转 因动物深入研究提供参考。 关键词 睡美人(sleeping beauty, SB) ，真核表达载体，转 因动物 Construction of Sleeping Beauty(SB) Transposon Vector and Its Expression in Porcine (Sus scrofa ) Fetal Fibroblasts Cells ZHOU Jia-Qing 1,2 WANG Sheng-Zhi1 SONG Cheng-Yi1,2* GAO Bo1 LI Kui2 QIAN Li-Li2 CUI Weng-Tao2 MU Yu-Lian2 LI Bi-Chun1 1 College of Animals Science and Technology, Yangzhou University, Yangzhou 25009, China; 2 Key Laboratory of Farm Animal Genetic Resources and Utilization of Ministry of Agriculture, Institute of Animal Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China * Corresponding author, chengyilab@ Abstract The sleeping beauty (SB) transposon is a Tc1/mariner family transposon. In order to examine the transposition efficiency of SB when it is used with different transposases and the same transposase at different ratios, our study constructed recombinant vector which was tran