人CD24分子成熟多肽的原核表达及抗体制备.pdfVIP

中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology，2011，31(12)：39．45 人 CD24分子成熟多肽的原核表达及抗体制备冰 林 洁 马 岚 张士煜 管常东 李 旋 吕 琦 (1云南大学生命科学学院单克隆抗体工程技术中心 昆明 650091 2清华大学深圳研究生院生命学部 深圳 518055) 摘要 目的：为获得抗人 CD24分子成熟多肽核心蛋 白(hCD24N)的多克隆抗体 。方法：制备 CD24表达阳性的人肿瘤细胞 cDNA，采用PCR法扩增 hCD24N的编码基因，构建pGEX—KGV— hCD24N原核表达质粒；转化大肠杆 菌 13L21(DE3)，乳糖诱导表达；经 GST亲和拄层析、SDS— PAGE和Westernblotting制备并鉴定纯化的GST—StraptagII．hCD24N融合蛋 白；免疫新西兰大 白兔 制备抗血清并用rProteinA亲和柱层析纯化多克隆IgG抗体；用间接 ELISA法测定抗体效价， Westernblotting鉴定抗体特异性，同时采用细胞免疫荧光检测技术对抗体的特异性和应用可行性 作进一步评价。结果：实现了hCD24N基因的克隆以及在原核细胞中的可溶性重组融合表达，得 到了纯化后的 目的融