尖吻蝮蛇蛇毒中一种新型酸性磷酯酶的纯化和表征.pdfVIP

ISSN 1oo7—7626 中国生物化学与分子生物学报 2009年 1O月 CN 11-3870／Q ChineseJournalofBiochemistryandMolecularBiology 25(10)：932～937 尖吻蝮蛇蛇毒中一种新型酸性磷酯酶的纯化和表征 潘剑茹¨，何火聪 ’，’ 刘 枋 ’，，饶平凡 ’ ， (福州大学生物工程研究所 ，福州 350002； 福建省肿瘤 医院，福州 350014) 摘要 从尖吻蝮蛇蛇毒 中，通过嗜硫色谱、SephadexG一75、Blue胶和 POROSHQ20离子交换色谱 ，分 离纯化得到纯组分AA—PLA，一I，并证 明其为新型酸性磷酸酯酶 A，．经鉴定，该酶为分子量 14．4kD 的单体蛋白，等电点5．66，不含 中性糖基 ，N端序列为 sLIQFETLIMKVVKK，其磷酸酯酶 A 活性的最 适温度和pH条件分别为50℃和 pH10．此外，该酶蛋白酶活性较弱，无 出血毒性 ，但具有抗凝血活 性 ，且其抗凝血活性耐热至70c二《． 关键词 尖吻蝮蛇；蛇毒；酸性磷酯酶 A：；抗凝血活性 ；纯化 中图分类号 Q556 ．9 PurificationandCharacterizatiOn0faNovelAcidicPhospholipaseA2 from Venom ofSnakeAgkistrodonacutus PANJian．Ru ，HEHuo—Cong’’’，LIUFang’’，RAOPing—Fan。 (”InstituteofBiotechnology，FuzhouUniversity，Fuzhou 350002，China；”FujianProvincialTumorHospital，Fuzhou 350014，China) Abstract AnovelacidicphospholipaseA2(AA—PIJA2一I)waspurifiedfromthevenom ofsnakeAgkistrodon acutus by thiophilic affinity chromatography using Sephadex G一75， blue Affi—gel and anion—exchange chromatographywithPOROSHQ20．TheobtainedAA—PLA2一1wasamonomerof14．4kDwithisoelectric pointof5．66asdeterminedbySDS—PAGE andIEF，andnoneutralcarbohydratecontaminantwasdetected． The15N—terminalaminoacidsofAA—PIA2-1wereresolved asSLIQFETLIMKVVKK．Theoptimal phospholipaseA2activitywasobservedatpH 10．0and50 ℃ ．AA—PLA2一Iexhibitedananticoagulationactivity atupto70℃ ，butitsproteolyticactivitywasweakandunstabletoheat，andnohemorrhageactivitywas found． Keywords Agkistrodonacutus；snakevenom；acidicphospholipaseA2；anticoagulantactivity；purification 磷 酸酯 酶 A2(phospholipaseA2PLA2；E．C． 化出一种无抑制血小板聚集活性的酸性 PLA．利用 3．1．1．4)能催化磷酸蛋 白的磷酸酯键水解而去磷 基因工程法 ，从安徽源五步蛇蛇毒 中得 到 了4种 酸化，几乎在所有的细胞 内都存在 ，在生物合成类花