地衣红染色-乙肝病毒.docVIP

地衣红染色- 包涵体- 乙肝抗原 目的：病毒体积微小，只有电子显微镜才能见到。病毒只能在宿主细胞内繁殖因此可称为寄生虫。宿主细胞内的病毒微粒称为病毒包含体，可在光镜下观察到。 HBsAg (乙肝表面抗原) 常出现在肝细胞胞质内。Kupffer 细胞也可显示抗原。 如果很多肝细胞被感染。抗原以微粒形式广泛散布、贯穿于细胞质中或集中在细胞质外围至肝窦之间，这就称为毛玻璃样。HBsAg在单个细胞内出现时，在于细胞质内呈椭圆形、圆形或不规则颗粒，特别是在核周的位置。这个程序也可染铜结合蛋白。 原理：地衣红染包涵体呈毛玻璃样。 对照：肝炎阳性的肝(肝炎携带者)。已知的铜对照。 固定：固定良好的组织。 技术：4-5m石蜡切片 设备：染色缸，蒸馏水清洗玻璃器皿。 试剂： 高猛酸钾 高猛酸钾Potassium permanganate 0.15 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 ml 3% 硫酸sulfuric acid 5.0 ml 使用前配制，用后丢弃。 警告：刺激性，避免接触和吸入。 5% 草酸 草酸Oxalic acid 5.0 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 ml 混合溶解，标签，保存期1年。 警告：刺激性，避免接触和吸入。 0.5% 高碘酸 高碘酸Periodic acid 0.5 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 ml 混合溶解，标签，保存期1年。 警告：刺激性，避免接触和吸入。 地衣红： 地衣红，自然Orcein, natural 1.0 gm 70% 酒精alcohol 100.0 ml 盐酸Hydrochloric acid 1.0 ml pH 值必须在1 至 2，溶液成熟至少需要48 hours，使用前过滤。保存期6个月。 警告：易燃性，刺激性。 分化液： 70%酒精 alcohol 100.0 ml 盐酸Hydrochloric acid 1.0 ml 新鲜配制，用后丢弃。 警告：易燃性，刺激性，腐蚀性。 安全：戴丁腈手套和白大衣，戴微过滤口罩。避免接触和吸入。 高猛酸钾：对皮肤和眼睛刺激，摄入可引起严重的胃肠反应。强氧化剂。 草酸：能引起严重的眼睛、皮肤和粘膜灼伤。吸入和摄入毒性。影响靶器官为肾血管和心血管系统，反复接触能引起皮炎。腐蚀性。 硫酸：吸入烟雾有毒性。影响靶器官为皮肤、呼吸系统、生殖系统及胎儿系统。对皮肤、眼睛和呼吸道有刺激性。当使用硫酸时应使用警告标志。慢慢加入溶解。 盐酸：对皮肤、眼睛和呼吸道有剧烈的刺激性，影响靶器官为皮肤、眼睛、呼吸系统、生殖系统及胎儿系统。腐蚀性。 程序： 1. 脱蜡至蒸馏水。 2. 高猛酸钾溶液10 minutes。 3. 流水冲洗。 4. 5% 草酸漂白，直至无色。 5. 流水冲洗，蒸馏水稍洗。 6. 0.5%高碘酸5 minutes。 7. 流水冲洗，蒸馏水稍洗。 8. *地衣红液 微波低火30-45 sec，放置30 minutes，镜检，如果黑色不够返回再染。 9. 70%酒精稍洗。 10.如果需要时可用分化液分化，镜检。 11. 70%酒精稍洗。 12. 脱水、透明和封固。D * 传统方法：地衣红液室温 4-16 hours。 结果： HBsAg、弹性纤维：黑褐色-黑紫色 铜结合蛋白：黑紫色 背景：浅褐-浅紫色 参考文献： Sheehan D, Hrapchak B, Theory and practice of Histotechnology, 2nd Ed, pp 247-248, Battelle Press Ohio Crookham,J, Dapson,R, Hazardous Chemicals in the Histopathology Laboratory, 2nd ED, 1991, Anatech Luna, L, Histopathologic Methods, 1st Ed, 1992, pp 295-296, American Histolabs Inc. Luna, L, Histo-Logic, 1978, Vol. VIII. No. 4. Recommended Procedure for Demonstrating Hepatic B Antigen in Parafin Sections, LAB-TEK Div. Miles Lab. Inc. 程序卡 地衣红染色- 包涵体- 乙肝抗原 对照：肝炎阳性的肝(肝炎携带者)。已知的铜对照。 技术：4-5m石蜡切片 1. 脱蜡至蒸馏水。 2. 高猛酸钾溶液10 minutes。 3. 流水冲洗。 4. 5% 草酸漂白，直至无色。 5. 流水冲洗，蒸馏水稍洗。 6. 0.5%高碘酸5 minutes。 7. 流水冲洗，