NR6A1过表达腺病毒载体构建及在血管平滑肌细胞中的表达.pdfVIP

张亚辉等．NR6AI 过表达腺病毒载体构建及在血管平滑肌细胞中的表达 ·分子生物学 · F。+’+ 。+。+。+。+’+’+。+。+。+’+。+。+。+1+’+’+’+’+’+ ’+’+。+’+。+。+’+。+。+ 。+”+’+。+。+。+。+。+。+。+。+。+- +一+ ．引用本文格式：张亚辉，钱航，张志峰，等．NR6A1过表达腺病毒载体构建及在血管平滑肌细胞中的表达[ J ] ．湖北医药学院学报，20 12 ， ’ 3 1( 3) ：181—185 ． NR6A1过表达 腺病毒载体 构建及在血 管 平滑肌细胞 中的表达 张亚辉1’2， 钱航1， 张志峰3， 杨汉东1， 闵新文1， 郎明健1， 张鹏1，3 ( 湖北医药学院1心脏病中心；2病理生理学教研室；3生理学教研室，湖北十堰442000) [ 摘要] 目的：构建核受体家族分子NR6A1重组腺病毒载体，观察NR6A1蛋白在血管平滑肌细胞中的表达。 方珐：从eDNA文库中，利用PCR方法钓取 目的基因NR6A1，采用I n—Fus i on克隆技术将 目的基因插入腺病毒穿梭 质粒pDC315—3FLA ，将重组质粒与辅助包装质粒pBH l ox AEl ，3 Cr e共转染HEK293细胞，整合包装成重组腺病 毒。运用蛋白免疫印迹技术检测NR6A1蛋白表达水平；运用免疫荧光化学技术检测NR6A1蛋 白在平滑肌细胞中 的亚细胞定位。结果：通过I n ．Fus i on技术获得pDC．NR6A1- 3FLA 阳性质粒，该质粒在HEK293细胞中重组成腺病 毒Ad—NR6A1；蛋 白免疫印迹技术发现pDC—NR6A1- 3FLA 重组质粒及Ad—NR6A1均能够正确表达NR6AI 蛋 白；而 且该蛋白定位于培养的血管平滑肌细胞核中。结论：I n—Fus i on技术能够高效克隆NR6A1基因，所构建的NR6A1过 表达腺病毒能够正确表达NR6A1核蛋 白，NR6A1定位于血管平滑肌细胞核中。 [ 关键词] NR6A1；I n- Fus i on克隆；平滑肌细胞 [ 中图法分类号] Q782 [ 文献标识码】A [ 文章编号] 1006—9674( 20 12) 03—0181—05 Cons t r uct i on of Adenovi r us Expr es s i ng NR6A1 and Eval uat i on of i t s Expr es s i on i n Smoot h Muscl e Cel l s ZHAN Ya—hl l i ‘”，QI AN Hang，ZHAN Zhi - f en91”，YAN Han—don91，MI N Xi n ．wenl ，LAN Mi ng-j i anl ，ZHAN Pen9 1 ·3 ( 1Car di ovas cul ar Res ear ch Cent er ；2Depar t ment of Pat hophys i ol ogy ；’Depar t ment of Phys i ol ogy ，Hubei Uni ve 您i t y of Medi - ci ne ，Shi yan ，Hubei 442000，Chi na) Abst r act ：Obj ect i ve To const r uct adenovi r us expr es si ng NR6A1 and eval uat e i t s expr es si on i n cul t ur ed vas cul ar smoo