标准化实时荧光定量PCR技术流程.pdfVIP

标准化实时荧光定量PER技 流程 曹龙凯，郭春华 (西南民族大学 生命科学与与技术学院，动物遗传育种国家民委一教育部重点试验室，成都 610041) 摘 要：实时荧光定量PCR(RT一9PCR)是把酶动力学、核酸扩增与杂交、光谱分析和实时检测技术巧妙结合 的一项技术，具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等特点，因此广泛应用于病 毒学、遗传性疾病、肿瘤和癌症的诊断等方面，成为分子生物学研究中的重要工具。文章根据MIQE指南简要介 绍RT—qPCR规 范的试验流程 。 关键词：RT—qPCR；MIQE；RNA的提取；RT—PCR；引物设计；数据分析 中图分类号：Q522；Q522．6 文献标志码：A 文章编号：1001—0084(2012)04—0013—05 ●t●and●ard-I●Zat●IIOn ●一卜-IU0rescenCeU、Uant…itat●IV‘e PolymeraseChainReactionProcess CAOLongkai，GUOChunhua (CollegeofLifeScienceandTechnology，SouthwestUniversityforNationalities，KeyLaboratoryofAnimalGeneticsandBreeding， StateEthnicAffairsCommissionandMinistry ofEducation，Chengdu610041，China) Abstract：Real—timequantitativepolymerasechainreaction(RT—qPCR)istechnology，whichiskillyunited withenzymekinetics，Nucleicacidamplificationandhybridiationspectralanalysistogether，andwidelyusedinvi— rology，geneticdisease，tumorandcancerdiagnosis；ithasthecharacteristicsofstrongspecificity，highsensitivity， finerepetitivenessandaccurateness，fastandtotallyclosedraction．ThereforeReal—timePCR haschangedtoaim— portantinstrumentinresearchofmolecularbiology．BasedonMIQEguidebrieflydescribestheexperimentalpro— cessaspecificationofRT-qPCR． Keywords：RT—qPCR；MIQE；RNAextraction；RT-PCR；primerdesign；dataanalysis 随着分子生物学的发展 ，实时荧光定量 PCR 试验 、基因组序列、RNA干扰 、代谢研究和NDA (RT—qPCR)技术已经成为检测不同样品间基因表 微阵列分析的国际标准一样，作为RT—qPCR的国 达水平定量差异的权威性方法，但是也出现了许多 际标准——MIEQ也被收入MIBBI l。MIQE对RT— 缺陷，包括试验设计不合理、对照和重复缺乏、分 qPCR的过程做了详尽的阐述 ，从而使科学工作者 析方法和报告形式多样 、RNA样 品质量 、引物和 能获得一致的、高质量的RT—qPCR试验数据。按 探针低劣选择等。实时荧光定量PCR试验出版物 照这一标准，可以规范试验操作，提高研究者对试 所需最小信息量 (MIQE)是一套国际新推出的指导 验结果的可信度，增强试验的透明度，促进试验室 方针，对RT—qPCR的试验和发表文章所必需的信 之问的一致性，进一步规范qPCR的仪器和试剂的 息提出了最低限度的标准