猕猴肉瘤病毒SV40 T—ag—C基因克隆及序列分析.pdfVIP

第 29卷 第 6期 实验动物科学 Vo1_29 No．6 2012年 12月 LABORATORY ANIMALSCIENCE December2012 、 矿 研究报告 、2 ≯ 猕猴 肉瘤病毒 SV40T—ag—C基因克隆及序列分析 叶尤松 罕圆圆 李跟党 匡德宣 唐东红 (1．中国医学科学院／北京协和医学院 医学生物学研究所，昆明 650118) (2．云南省中医学院，昆明 650108) 摘要：目的 对来源于一株 自然感染猕猴肉瘤病毒 SV40的猴肾细胞培养物进行大T抗原 C一羧基端 (T．agC)基因 克隆及核苷酸序列分析。方法 采用PCR法分别从一株 自然感染 SV40病毒的猴肾细胞培养物和 SV40776标准 株接种的VeYO细胞培养物提取的总DNA中扩增出441bp的SV40大T抗原 C一羧基端 (T-ag—C)基因片段 ，分别将其 克隆到PMDI8一T载体 中，转化至 JM109感受态大肠杆菌细胞后，挑取阳性克隆进行测序鉴定，并对获得的 目的基 因核苷酸序列进行序列分析及同源性分析。结果 来源于猴肾细胞培养物的SV40大T抗原片段与本实验室来源 于云南野生猴群 的猕猴外周血所得到的 SV40大 T抗原 片段 同源性为 97．31％，与 GenBank中登录号为 NC一 001669．1序列进行比对 ，同源性为 96．33％；与SV40-776标准株接种的vero细胞培养物所扩增的大T抗原片段同 源性为97．55％。结论 对大T抗原基因克隆和序列分析是了解和掌握 SV40病毒分子流行病学及其变异趋势的 重要手段 。 关键词：猴病毒 SV40；T—ag—C抗原基因；序列分析 中图分类号 ：Q939．47 文献标识码 ：A 文章编号：1006—6179(2012)06-0005—05 猴肉瘤病毒 (Simianvirus40，SV40)属乳头多 株，其基因虽然高度保守，但存在两个可变区，分别 瘤病毒科 (Papovaviridae，简称乳多空病毒科)多瘤 是调控区和大 T抗原 C末端 (T—ag-C)区，不同来源 病毒属 (polymavirus)，病毒粒子为约45nm大小 的 的SV40 自然分离株可 以根据这两个 区域进行识 二十面体结构，密度为 1．34～1．35g／cm ，其基因结 别 ¨…。T—ag-C基因变异区在人类肿瘤相关序列中 构为共价闭合环状双链分子，至少编码 6种病毒蛋 可被频繁的检测 出来 。 白；两个早期编码的非结构多肽 ：大T抗原 (Tag)及 本研究对来源于 自然感染 SV40的猴 肾细胞培 t抗原 (tag)，一个 与组装病毒粒 子及加工 晚期 养物和来 自于WHO的SV40参考株 776的Vero细 mRNA有关 的agnoprotein(未知蛋白)和三个衣壳蛋 胞培养物总 DNA扩增 出的 SV40T．ag-C基 因片段 白VP1、VP2、VP3。标准参考株 SV40—776含 5243 基因序列进行测定，并分别与已知的来源于 自然感 个核苷酸，不同分离株碱基数 目各异，SV40病毒具 染 的野生猕猴外周血 SV40T-ag—C片段 、GenBank中 有使啮齿类动物及人源多种组织培养细胞永生长和 登录号为NC_001669．1序列进行比对 ，分析它们之 转化能力 ¨ 。SV40首次报道是 1960年 由Sweet 间遗传变异性及亲缘关系，通过对不同来源的SV40 和 Hilleman从来源于猴 肾细胞 的脊髓灰质炎及腺 T—ag—c基因片段序列 比对来了解 T—ag—C基 因不 同 病毒疫苗中分离得到[43。SV40与几种人 的乳多空 型别之间的遗传变异性及 SV40病毒分子流行病学 病毒抗原有关，但又不完全相 同，它具有致肿瘤的能