PCR技术在检验医学中的应用.pdfVIP

PCR 术在检验医学中的应用 赵建华 （江苏省临床检验中心， 南京210009 ） 1953 年Watson 和Crick 的DNA 双螺旋结构的发现开创了分子生物学的新篇章，1976 年美国华裔科学家Kan 等应用液相DNA 分子杂交技术成功进行了镰形细胞贫血症的基因诊 断，标志着分子生物学技术进入检验领域，而 1983 年美国 PE-Cetus 公司 K.B Mulliss 首创的聚合酶链反应（PCR ）技术，则完全改变了检验医学的发展，使检验医学从常规生化、 免 和微生物对疾病或病原体的表型认识和表型诊断，发展为分子诊断学在本质上认识疾病 和诊断疾病，PCR 技术给检验医学带来了质的飞跃。 PCR 是一种极为敏感的放大工具，它能在短时间内将靶DNA 放大百万倍甚至千万倍。 而PCR 技术指的是以PCR 为基础的核酸检测技术，除靶序列的扩增放大以外，还必须包括 其特异性分析检测的部分；它的应用不仅能使临床常规样本的检测灵敏度极大地被提高，而 且还能克服Southern 和northern 印迹杂交、RFLP 等传统的基因诊断技术操作繁琐，耗时和 所需样本量大等缺 ，尤其是近年来实时荧光定量 PCR 技术的应用对临床基因检测易污染 和无法定量问题的解决，彻底打破了基因诊断技术在临床应用方面的局限性。毫无疑问， PCR 技术将是检验医学未来的发展方向并成为疾病的常规诊断技术。 1、PCR 技术在检验医学中的地位 人类所有疾病或健康状态都与基因有直接或间接的关系，除了外伤、极度营养缺乏等状 态外，每种疾病都有其相应的致病基因和/或易感基因存在。同时，人类也是一个具有多态 性的群体，不同群体和个体在对疾病的易感性、抵抗性以及其它生物学性状 （如对药物的反 应性等）方面均存在差异，该差异的基础就是人类基因组DNA 序列的变异性。 如何探知这些基因的变异？传统诊断方法是通过表现型来推测基因型，属于间接诊断； 而基因诊断是从基因着手来推断表现型，以探测基因的存在，分析基因的类型和缺陷及其表 达功能是否正常进行诊断，属于直接诊断，不受细胞类型、发病时间和年龄等限制。随着越 来越多的致病基因及其连锁DNA 标记被克隆，尤其是基因组计划的实施，基因诊断正以惊 人的速度向前发展。 PCR 技术是基因诊断发展的主 方向。目前，全世界利用 PCR 技术诊断感染性疾病 每年达几千万人次。1995 年，美国国家临床检验标准化委员会(NCCLS) 颁布了关于感染性 疾病分子诊断应用范围、条件和质量控制细则等准则文件，NCCLS 分子微生物委员会主席 Enns 断言，以基因扩增和探针检测为主的分子生物学方法将取代传统的病原体培养和生化 检测方法。1998 年，国际临床化学学会发布了关于分子扩增在临床诊断中应用的质量评估 基础的文件并对 PCR 操作的各个环节进行了详细论述。1999 年美国研究病理学会和分子 病理学协会创刊出版了 《The Journal of Molecular Diagnostics 》,标志基因诊断技术已 经发展成为一个成熟的学科——分子诊断学。2002 年NCCLS 又发布了PCR 定量技术应用于 传染病领域的国际标准指南，这是包括中国临床实验室标准委员会在内的一个世界范围内的 指南；同年， 《自然遗传学》杂志发表一项调查报告“未来5 至10 年内最有望改善全球健 康状况的十大关键生物技术”，位居第一位的就是针对传染病的分子扩增诊断技术。 在我国，分子诊断学得以普遍接受和较快发展是在90 年代，主要归功于PCR 技术的引