人类胚胎干细胞的培养.pdfVIP

细胞生物学杂志 Chinese Journal of Cell Biology 2009, 31(5): 738−739 专题介绍 特约综述 人类胚胎干细胞的培养 自第一株人类胚胎干细胞(hESCs)系面世以来, 2 制备饲养层 hESCs 在人类疾病治疗等多领域的潜在应用一直在 本刊第2期与第4期的专题分别向大家介绍了制 吸引越来越多的科学家投入到这项研究中。在国际 备饲养层的方法和培养hESCs 时制备饲养层的注意 干细胞领域, hESCs的培养方案已经初步规范化并且 点, 在此不再赘述。 随着hESCs 的自我更新和分化调控机制上新发现的 3 解冻hESCs 不断涌现, 细胞维持方案也在随之发展和改进。本 (1) 解冻前1 h, 将已经用基质胶处理过并且已 期专题我们将向读者介绍一种可以较好地维持 经铺好饲养层细胞的6孔板吸掉MEF 培养液, 用PBS hESCs 正常遗传特性、全能性和自我更新能力的 洗两遍后, 添加已经温育好的hESCs 培养液1 ml/孔。 hESCs 维持方案。 (2) 把hESCs冻存管从液氮罐中取出, 两手来回 1 培养试剂 搓冻存管10~15 s, 直到冻存管外的霜除去。 饲养层细胞完全培养液: 90 % 高糖D M E M (3) 将冻存管浸入37 ℃水浴, 轻轻摇动。注意: (Gibco 12430); 10% FBS (Biochrom S0615) 。 不要浸没盖子。 hESCs 完全培养液: 80% DMEM/F12 (Gibco (4) 用酒精棉球擦拭整个冻存管, 并在超净台中 11330); 20% 血清替代物(Gibco 10828); 2 mmol/L 风干。 L -glutamine (Gibco 25030); 2 mmol/L 非必需氨基酸 (5) 在15 ml 离心管中加入5 ml 已经温育过的 (Gibco 11140); 0.1 mmol/L β-巯基乙醇(Gibco 21985- hESCs 完全培养液, 用1 ml 微量加样器轻柔地将冻 023); 4 ng/ml bFGF 溶液(Gibco 13256-029) 。 存管内的细胞吸起, 转移至上述15 ml 离心管中, 解 bFGF 储存液: 冻的过程尽量快速、温和地进行。 组分 含量 (6) 轻轻混匀两次, 尽量不要吹散细胞团块。 bFGF 10 μg 静置离心管5 min, 使细胞团块在重力作用下下沉。 在PBS 中加入0.1% BSA 5 ml (7) 吸掉上清液。 (8) 重新加入5 ml hESCs 完全培养液, 重复步 保持无菌, 分装后−20 ℃保存。 骤6 ∼7 。 基质胶溶液(用以铺饲养层细胞前处理培养容器 (9) 加适量培养液重悬细胞团, 并将细胞团均匀 底面): 地加到6 孔板中的每个孔内, 1 ml/ 孔。 组分 含量 (10) 小心地将6 孔板放入培养箱, 避免震动。 基质胶(matrigel, Invitrogen, 354234) 1 ml (11) 48 h 后换新鲜的培养液, 之后每24 h 换 DMEM/F12 200 ml 液。 溶解基质胶前1天, 将