Bcl-2蛋白在蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸诱导的体外神经细胞退化中的作用.pdfVIP

维普资讯 · 6 · ActaAcadMedNeiMongol Feb．2008 f．30 ： Bcl一2蛋 白在蛋 白磷酸酶抑制剂 冈田酸诱导的 体外神经细胞退化中的作用 陈丽琴 (内蒙古医学院基础医学院，内蒙古 呼和浩特010059) 摘 要：目的：在体外水平条件下，探讨抗凋亡蛋白Bcl一2在蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸所诱导的阿尔茨海 默病 (Alzheimerdisease，AD)样神经细胞退化中是否具有细胞保护的作用。方法：以人神经母细胞瘤细胞SH— SY5Y作为体外神经细胞研究材料 ，采用脂质体介导重组质粒 pEGFP—N1一Bcl一2瞬时转染细胞的方法，造成 神经细胞外源性过表达Bcl一2蛋白与绿色荧光蛋白的融合蛋白，以荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋 白显示转 染阳性细胞，再用冈田酸处理转染细胞，通过DNA荧光染料染色法显示细胞凋亡核形，显微锖下计数细胞测定 凋亡率。结果：① 冈田酸剂量依赖性地引起SH—SYSY细胞凋亡，DNA荧光染料染色显示，80nmol冈田酸作用 24h引起该种细胞 出现多量核浓聚、核碎裂的凋亡核形；②脂质体介导pEGFP—N1一Bc1—2和空质粒pEGFP— N1瞬时转染SH—SYSY细胞，细胞分别过表达Bcl一2一绿色荧光蛋白的融合蛋 白和绿色荧光蛋白，前者主要分 布于近核的胞质，而后者则在胞质和胞核 中均有分布；200nmol经典促凋亡剂星形孢菌素处理细胞24h，Bcl一2 重组质粒转染组的细胞凋亡率显著低于空质粒转染组的细胞凋亡率(P0．01)；(~)80nmol冈田酸处理细胞24h， Bcl一2重组质粒转染组的细胞凋亡率显著低于空质粒转染组的细胞凋亡率(P0．05)。结论：冈田酸能引起体 外培养神经细胞SH—SYSY发生凋亡性退化，Bcl一2重组质粒瞬时转染引起该种细胞过表达具有抗凋亡活性的 融合蛋白Bcl一2一绿色荧光蛋白，Bcl～2过表达能部分抑制冈田酸所致SH—SYSY细胞退化，这提示Bcl一2在 冈田酸所致阿尔茨海默病样神经细胞退化过程中可能具有细胞保护作用。 关键词：Bcl一2蛋 白；神经细胞；凋亡；冈田酸；转染 中图分类号：R31 文献标识码 ：A 文章编号：1004—2113(2008)O1一O0o6一o7 EFFECT oF BCL 一2oVEREXPRESSION ON OKADAIC ACID —INDUCED NERVE CELL APOPTOSIS IN VITRo CHEN Li——qin (InstituteofBasicMedicine，InnerMongoliaMedicalCollege，Hohhot010059China) Abstract：Objective：Toexploretheeffectofanti—apoptoticBcl一2proteinonOkadaicacid (OA)一inducednervecellapoptosisinvitro．Methods：HumanSH—SYSYneuroblastomacellswere appliedtoinvestigatehteinfluenceofexogenousBcl——2overexpressiononapoptoticnervecellinduced byOA．MTIreductionassaywasusedtodeterminecellviabilityafterOA rteatment．Lipofectamine wasusedtomediatetansfectionofrecombinantplasmidpEGFP—N1一Bcl一2 intoSH —SY5Y ceHs． ExogenousBcl一2一GFP(greenfluorescentprotein，GFP)fusionproteinwasobservedbyfluorescent