真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1-ZNF217的构建及表达.pdfVIP

2010;30(2)%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%南方医科大学学报(J%South%Med%Univ) · 391 · 真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1-ZNF217 的构建及表达 1 2 1 1 2 黎 静 ，周 军 ，钟 梅 （南方医科大学南方医院 妇产科， 病理科，广东 广州 510515 ） 摘要： 目的克隆人类ZNF217 基因 cDNA 全长， 构建ZNF217 的真核表达载体， 并在真核细胞中表达。 方法 采用 RT-PCR 技术从人HO-8910 卵巢癌细胞总RNA 中扩增ZNF217cDNA 基因片段， 经过酶切鉴定后， 克隆至pMD%19-T% easy ，测序证实碱基序列无误后，再克隆到真核绿色荧光蛋白表达载体（pEGFP-N1 ）上，并转染到真核细胞，观察其在真 核细胞中的表达。 结果序列测定证实克隆的ZNF217 全长 cDNA 阅读框正确完整，酶切和序列测定证实ZN217 正确 插入pEGFP-N1 载体中，该重组载体能够在真核细胞中表达。 结论成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-ZNF217 。 关键词： ；真核表达；基因克隆；载体构建 ZNF217 中图分类 ： 文献标识码： 文章编 ： R34 A 1673-4254(2010)02-0391-03 Construction and expression of the eukaryotic green fluorescent protein expression vector pEGFP-N1-ZNF217 1 2 1 LI%Jing ,%ZHOU%Jun ,%ZHONG%Mei 1 2 Department%of%Obstetrics%and%Gynecology, % Department%of%Pathology, %Nanfang%Hospital, %Southern%Medical%University, %Guangzhou% 510515,%China Abstract: Objective To%construct%the%eukaryotic%green%fluorescent%protein%expression%vector%pEGFP-N1-ZNF217%and%express% the% vector% in% eukaryotic% cells. % Methods ZNF217% gene% fragment% was% amplified% by% reverse% transcriptase-polymerase% chain% reaction% (RT-PCR), %and%after%analysis%of%the%product%by%electrophoresis%and%sequencing, %the%fragment%was%inserted%into% pEGFP-N1%fluorescent%expression%vector. %The%constructed%expression%vector%was%then%transfected%into%eukaryotic%cells%for%its% expression.%Results and Conclusion Restriction%endonuclease%digestion%and%sequence%analysis%confirmed%correct%construction% of% the% recombinant% vector% pEGFP-N1% and% the% expression% vector% pEGFP-N1-ZNF21