猪瘟兔化弱毒株E2蛋白ABCD抗原结构域在大肠杆菌BL21（DE3）和Rosseta（DE3）中的表达及鉴定.pdfVIP

中国动物传染病学报 2012，20(6)：11-15 ChineseJoumalofAnimalInfectiousDiseases · 研究论文 · 猪瘟兔化弱毒株E2蛋白ABCD抗原结构域 在大肠杆菌BL21(DE3)和 Rosseta (DE3) 中的表达及鉴定 李儒曙 ，苏惠龙 ，刘宇 ，张健腓 (1．珠海市动植物防疫监督检验中心，珠海 519000；2．珠海出入境检验检疫局，珠海 519015； 3．华南农业大学兽医学院，广州510642；4．广东省农业科学院兽医研究所， 广东省兽医公共卫生公共实验室，广州 510640) 摘 要：为获得大量的猪瘟病毒重组蛋白抗原，本文构建了猪瘟兔化弱毒株E2蛋白ABCD抗原结构域原核重组表达质粒pET- 32a(+)．ABCD，对该重组表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosseta(DE3)中的表达产量进行了比较分析 ，并采用胶体 金免疫层析和蛋白质免疫印迹鉴定重组蛋白的反应原性。结果表明重组质粒pET-32a(+)．ABCD在大肠杆菌BL21(DE3)和 Rosseta(DE3)中均可以获得可溶性表达，目的蛋白表达量分别 占总蛋白量的比例为l1．4％和 19．7％，大肠杆菌Rosseta(DE3) 作为表达宿主菌更高效，且重组蛋白具有反应原性。该研究为猪瘟病毒重组蛋白抗原的制备提供了参考。 关键词：E2蛋白ABCD抗原结构域；BL21(DE3)和Rosseta(DE3)；表达 ；鉴定 中图分类号：$852．651 文献标志码：A 文章编号：1674．6422(2012)06—0011-05 IDENTIFICATIoN oFTHEABCDANTIGEN REGIoN IN E2EXPRESSION oFHoGCHoLERALAPINIZEDVIRUSINEC01，BL21(DE3)ANDE CD ， RoSETTA(DE3) LIRu．shu，SU Hui．1ong，LIUYu ，ZHANGJian．fei l1．ZhuhaiEpidemicPreventionandSupervisionCenterforAnimalsandPlants。Zhuhai519000,China；2．ZhuhaiEntry-Exit InspectionandQuarantineBureau，Zhuhai519015,China,3．CollegeofVeterinaryMedicine,SouthChinaAgriculturalUniversity, Guangzhou510642，China,4．GuangdongCommonLaboratoryofVeterinaryPublicHealth，InstituteofVeterinaryMe~cine,Guangdong AcademyofAgricutluralSciences，Guangzhou510640,Chin Abstract：Inordertoobtainplentyofrecombinantproteinofclassicalswinefevervirus，ABCD antigenregionofE2genewasamplified andusedtoconstructpET-32a(+)-ABCDplasmid．TheplasmidwasthentransformedintoE．coliBL21(DE3)andRosseta(DE3)．The yieldsofexpressedproductsinthesetwowerecomparedasareferencetochoosecompetentcells．TheE2proteinwasshowntobe expressedinbothE．coliBL21(DE3)andRosseta(DE3)andaccountedfor11．4％and19．7％ofthegrossbacterialproteinsasdetemrined inSDS—PA