槲皮素与顺铂对人膀胱癌裸鼠移植瘤抑瘤作用的研究.pdfVIP

广东医学 2011年 10月第32卷第 19期 GuangdongMedicalJournalOct．2011．Vo1．32．No．19 槲皮素与顺铂对人膀胱癌裸 鼠移植瘤 抑瘤作用的研究木 ‘ 陈景林 ，柳建军 ，黄炎松 ，陈松宁 ，陈俊虎 广东IF．学院附属医院 泌尿外科，教学部(广东湛江 524000) 摘【要】 目的 观察槲皮素(quercetin)与顺铂(cisplatin，DDP)联用对膀胱癌BIU一87细胞的BALB／c裸鼠 移植瘤生长的抑制作用，检测移植瘤中Bcl一2、Caspase一3和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平及肿瘤细胞凋 亡指数，探讨其作用机制。方法 建立膀胱癌细胞株BIU一87裸鼠移植瘤模型并随机分成4组：对照组、顺铂组、 槲皮素组、联合(槲皮素+顺铂)组。治疗间观察移植瘤体积和裸鼠体重的变化，第15天后将移植瘤完整取出，称 瘤重，计算抑瘤率，并用免疫组织化学技术检测各组移植瘤组织中Bcl一2、Caspase一3和 PCNA的表达，原位凋亡 TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果 各用药组肿瘤的生长受到明显抑制，瘤体质量明显低于对照组，其抑瘤 率分别为46．10％、39．17％、64．09％，联合组抗瘤作用进一步增强。Bcl一2和PCNA的表达在对照组高于各用 药组 (P0．05)，Caspase一3表达在对照组明显低于各用药组 (P0．05)；肿瘤细胞的凋亡指数在各用药组都比对 照组明显提高，差异有统计学意义(P0．05)。结论 槲皮素和顺铂均可明显抑制膀胱癌细胞在小鼠体内的生长 作用，两药联合应用的抑瘤效果优于两药单用。其作用机制可能是通过调控肿瘤中Bcl一2和 Caspase一3的表 达，也可能通过调节PCNA的表达，从而抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。 【关键词】 槲皮素；顺铂；膀胱肿瘤；细胞凋亡 膀胱肿瘤是泌尿系统最常见 的肿瘤之一，世界范 究所提供，顺铂购于江苏豪森药业股份有限公司，槲皮 围内，膀胱癌发病率居恶性肿瘤 的第 9位，其 中 素购于美 国Alfa公司，Bcl一2、Caspase一3兔抗 鼠单 70％～80％为表浅性膀胱癌 ，严重威胁着人们的健 抗、增殖细胞核抗原 (PCNA)鼠抗人单抗、SABC试剂 康和生活质量。目前 ，膀胱癌的治疗多采用手术和化 盒购 自福州迈新生物工程公司。TUNEL凋亡检测试 疗的综合治疗方法，但疗效不佳且化疗药物的不 良反 剂盒购 自武汉博士德生物有限公司。 应大，寻找新的药物治疗与治疗方法是临床急需解决 1．2 方法 的问题。槲皮素 (quercetin)是 自然界植物 中分布最广 1．2．1 细胞培养和动物模型的建立 BIU一87细胞 泛的黄酮类化合物之一，具有广泛的药理活性 ，如抗氧 为人膀胱上皮肿瘤细胞株，用含 10％胎 牛血清、2．0 化及清除氧 自由基作用 、抗纤维化作用 J。近年来研 mmol／LL—glutamine、100U／mL青霉素、100~S／mL链 究发现，槲皮素能够抑制多种肿瘤细胞的增殖、逆转肿 霉素的RPMI一1640培养液，在37℃、5％CO 的条件 瘤细胞的多药耐药性及增强其他抗肿瘤药物作用的敏 下进行培养 ，每隔3d用0．125％的胰蛋白酶和0．02％ 感性。目前鲜有关于槲皮素在动物体内对膀胱癌抑制 EDTA消化传代后继续培养。待传代足够数量后取对 作用的研究，2009年 1月至2010年6月我们应用人膀 数生长期 的细胞配制成细胞悬液。收集酶 一细胞溶 胱癌 BIU一87细胞建立动物模型，研究槲皮素单用以 液，1000r／min离心6min，用培养液洗 1遍，重悬细胞 及联合顺铂对膀胱癌移植瘤生长的影响，研究槲皮素 台盼蓝染色并用牛鲍计数板计数活细胞数达90％ 后， 的抗癌效应及初步探讨其作用机制，为槲皮素在膀胱 将单细胞悬液调整细胞浓度至 1×10 ·mL 准备接 癌治疗应用上提供一定的实验依据。 种至裸鼠身上。用6号针头注射器抽取0．2mL瘤细 1 材料与