人胚胎干细胞神经分化的方法探讨.pdfVIP

第 32卷 第 5期 中山大学学报 (医学科学版) Vo1．32 No．5 2011年 9月 JOURNALOFSUNYAT-SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) Sep． 2011 人胚胎干细胞神经分化的方法探讨 赖文玉 ，曾巧慧 ，吴燕云 ，成福义 ，李攀龙 ，李伟强 (中山大学 1．附属第二医院儿科，广东 广州 510120；2．中山医学院，广东 广州 510080) 摘 要：【目的】利用新建系的人胚胎干细胞株SYSU一7，运用胚体形成的方法，探讨不同的分化条件对胚胎干细胞神 经分化的影响。 【方法】首先检测人胚胎干细胞株SYSU一7的Oct4、SSEA4(stage—specificembryonicantigen一4)、TRA一1—60和 AKP (Alkalinephosphatase)等胚胎干细胞特异性标志物的表达及体内外三胚层分化的能力 ：之后 。应用含 20％Knockout SerumReplacement(KSR)的培养液和神经干细胞培养液(neuralprogenitormedium，NPM)分别诱导细胞形成悬浮的拟胚体 (悬浮时间为4d或7d)，然后将拟胚体贴壁于多聚鸟氨酸(Polyornithine，PO)和纤维粘连蛋白(Fibronectin，FN)包被的培养 皿中继续培养4—10d。在分化的不同时间点利用免疫荧光染色的方法检测胚胎干细胞和神经细胞相关的标志性抗原。结【 果】SYSU一7胚胎干细胞表达未分化细胞特异性标志Oct4、SSEA4，TRA一1—60，AKP染色呈强阳性，在体内外具有向三胚层分 化的潜能；在体外诱导其向神经分化 ，结果发现KSR培养液比神经干细胞培养液更有利于胚胎干细胞的神经分化 ，悬浮生长 7d的拟胚体贴壁后出现特征性的玫瑰花环样结构(rosettestructure)的时间更早、数量更多。结【论】SYSU一7细胞系具有 自我 更新及多向分化潜能等胚胎干细胞特性。本实验为研究人胚胎干细胞的神经分化提供了新的细胞模型和研究思路。 关键词 ：人胚胎干细胞：神经分化 中图分类号：Q254 文献标志码 ：A 文章编号：1672—3554(2011)05—0694—07 NeuralDifferentiationofHumanEmbryonicStem Cells LAIWen-yu，ZENGQiao—hui，WUYan—yun，CHENGFu-yi，LIPan—long，LIWei—qiang (1．DepartmentofPaediatries，TheSecondAffiliatedHospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou510120，China；2．Zhongshan SchoolofMedicine，SunYat—senUniversity，Guangzhou510080，China) Abstract：【Objective】Toexploretheneuraldifferentiationpotentialofanewhumanembryonicstemcellline，SYSU一7，through embryoidbodyformationunderdifferentcuhurecondition． M【ethods】DetailcharacterizationofSYSU一7cellswerecarriedoutby detectingtheexpressionofOct4，SSEA4，TRA一1—60，AKP，andmulti—lineagedifferentiationcapacityinvivoandinvitro．20％ KSR medium (KSR) andneuralprogenitormedium (NPM) wereusedtoinduceneuraldifferentiationofSYSU一7cells，respectively． Embryoidbodies(EBs)weregeneratedandculturedinsuspensionfor4do