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液质联用法检测污染食品和饲料中的多组分霉菌毒素 任一平 章 宇 邵双良 蔡增轩 冯 靓 王志刚* 浙江省疾病预防控制中心 浙江大学 中国浙江省杭州 310009 摘要：本文应用超高压液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱联用技术 UPLC-MS/MS，在多反应离子检测 方式下 （MRM）对食品、饲料中 17种曲霉、青霉和镰刀菌等霉菌毒素污染进行检测。本文着重对各 类样品中 17种霉菌毒素的提取、净化、液相分离及串联质谱等相关检测参数进行了最佳化研究。选 择 Zearalanone（ZAN）为内标，样品经混合溶剂 84/16的乙腈/水溶液提取, SPE柱净化、过滤， 浓缩、定容和过滤。采用二次进样法，经超高压液相 （UPLC）BEH C18（2.1×100mm、粒径 1.7μm） + - 柱分离，选用醋酸铵溶液和甲醇作为 ESI方式检测正离子的流动相；氨水溶液和甲醇作为 ESI方式 检测负离子的流动相，分别在6.5和3.5分钟内，经相同线性梯度洗脱分别将 10种阳离子和 7种阴 离子霉菌毒素得以分离。每种霉菌毒素各选择两个子离子作为定量和辅助定性离子。经方法学实验 + 验证：在ESI电离方式下10种霉菌毒素的最低定量限 LOQ范围为0.01～0.20μg/kg，均低于欧盟、 - 美国和其它各国对饲料、食品 （包括儿童食品）中各种霉菌毒素的最低限量。在 ESI电离方式下 7 种霉菌毒素的最低定量限LOQ范围为0.2～0.5μg/kg；17种霉菌毒素在各自线性定量范围内，相 2 关系数r均大于0.999；低、中、高浓度添加回收率范围为70.6～119.0%。该方法具有预处理简单、 检测速度快、灵敏度高的优点，可适用于复杂基质样品中多组分霉菌毒素的确认和准确定量检测， 可满足各国对上述霉菌毒素的最低检出限量要求 关键词：霉菌毒素，电喷雾，串联液质，多离子反应检测 1．概述 霉菌毒素 （Mycotoxins）是一类由霉菌产生的有毒性的二次代谢产物，广泛污染农作物、食品 及饲料等植物源性产品。目前已发现有 200多种，按其主要产毒素的菌种可分为曲霉菌毒素 （如黄 曲霉毒素、棕曲霉毒素、杂色曲霉毒素等），镰刀菌毒素 （如脱氧雪腐镰刀菌烯醇类、玉米赤霉烯酮、 [1] T-2毒素等），青霉菌毒素 （桔青霉素、疣孢漆斑菌Verruculogen）等几大类 。1993 年黄曲霉毒素 [2] B1 被世界卫生组织的癌症研究机构划定为A 类致癌物 。黄曲霉毒素由黄曲霉、寄生曲菌等多种霉 菌产生。基本结构为二呋喃和香豆素，已证实有17 种衍生物，其中最为重要的包括B1、B2、G1、 G2、M1、M2 等。黄曲霉毒素常常存在于土壤、植物、各种霉变的坚果特别是花生和核桃中，在霉 变的大豆、稻谷、玉米、通心粉中也经常发现黄曲霉毒素，其B1、B2、G1、G2 易污染多种农作物、 食品及饲料；M1 是黄曲霉毒素B1 的羟化产物，常经动物代谢产生并残留于牛奶等及其制品中。黄 曲霉毒素中的B1 属强致癌物，其作用机理是影响细胞膜，抑制RNA 合成并干扰某些酶的感应方式， 中毒症状主要是肝脏器官表现，按症状的严重程度不同，临床可表现为发育迟缓、腹泻、肝肿大、 肝出血、肝硬化、肝坏死、脂肪渗透、胆道增生等。 赭曲霉毒素是继黄曲霉毒素后又一个引起世界广泛关注的生物毒素。它是由曲霉属和青霉属的 几个种类的霉菌产生的一组毒性代谢产物。从对谷物的污染率、污染水平及对人畜的毒性考虑，赭 曲霉毒素A（OTA）是重要的具有卫生学意义的霉菌代谢产物，主要污染人类食物及动物饲料，赭曲 [3] 霉毒素主要危害肾，造成肾肿大；也可造成肠炎、淋巴坏疽、肝肿大等疾病 。欧盟规定其每周耐 受摄入量0.1μg/kg。 杂色曲霉毒素存在于一些奶