用高分离快速液相色谱系统进行黄嘌呤类化合物的高通量分离.pdfVIP

用高分离快速液相色谱系统进行黄嘌呤类化合 物的高通量分离 应用 生化、食品饮料、医药 作者 等梯度 HPLC 方法分析了液体饮料（茶、巧克力饮料和可可 饮料）中的可可碱、茶碱和咖啡因。 John W. Henderson and Ronald E. Majors Agilent Technologies, Inc. 前言 2850 Centerville Road Wilmington, DE 19808-1610 黄嘌呤类化合物是一类生物碱，常被用作轻度兴奋剂 USA 和支气管扩张剂，对哮喘症状有明显疗效。最常见的 黄嘌呤类化合物是咖啡因，主要存在于如咖啡豆、茶、 摘要 柯拉果等食品中，可可豆中也含有少量咖啡因。不可 思议的是，由于巧克力中含有可可碱、茶碱和咖啡因 黄嘌呤类化合物最好采用 C18 柱进行反相 HPLC 分离。研究 （都属于甲基茶碱类），因此，巧克力也是一种弱兴奋 发现，缩短柱长、减小粒径将使黄嘌呤类混合物的分离时间从 剂。这些黄嘌呤类化合物及其代谢物的化学结构见图 8 分钟缩短到 1.5 分钟，而分辨率没有明显损失。采用简单的 1。 图 1. 选用的黄嘌呤类化合物及其代谢物的结构 黄嘌呤类化合物在体内几乎 100% 被吸收，摄入后几 黄嘌呤类化合物分离固定相的选择 分钟内出现在血液中。黄嘌呤类化合物刺激中枢神经 HPLC 可以让感兴趣的峰在尽可能短的时间内得到分 系统，可作用于循环系统，松弛支气管平滑肌。众所 离。选择合适的固定相是方法开发的重要步骤。最初， 周知，咖啡因具有减轻睡意、缓解疲劳和醒脑的作用。 我们对几种不同的固定相进行了选择，以找到本研究 这些常见的黄嘌呤类化合物在体内代谢成可能对人体 最适合的固定相。图 2 显示了用 ZORBAX Stable- 有生理作用的各种化合物。 Bond 固定相 [氰基（CN ）、苯基、C 18] 和一种极性嵌 黄嘌呤类化合物常用反相 （ ）在 入固定相（ZORBAX Bonus RP ）对试验混合物中黄 HPLC RP-HPLC C 18 柱上分离 [1–3] 。虽然离子对色谱已被用于黄嘌呤的 嘌呤类化合物的分离。 分离 [ ] ，但使用水和乙腈作为缓冲液的 RP-HPLC 需 2 虽然 Bonus 柱的粒径不同，但这里我们的 目的是选择 要的流动相系统更简单。本篇应用报导了不同固定相 具有最佳选择性和最短保留时间的固定相。在所用的 对黄嘌呤类化合物分离选择性的影响，并探讨了粒径 条件下 ， 柱的保留最短（因为其烷烃链较短），但 CN 和柱长对分离速度的影响。最后，报告了巧克力型饮