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维普资讯 第 14卷第3期 中 国 水 产 科 学 VoI．14 NO．3 2007年 5月 JournalofFisherySciencesofChina May 2007 欧洲鳗鲡淋巴细胞转化试验条件的建立 郭松林1,2,3，关瑞章 一，冯建军 ，2，3 (1．集美大学 水产学院，福建 厦门361021；2．中国科学院 水生生物研究所 ，湖北 武汉 430072；3．中国科学院 研究生院， 北京 100039) 摘要：通过对培养时间、培养温度 、刀豆蛋 白A(ConA)质量浓度和鳗鲡血清质量分数 4个参数的测定 ，确定欧洲鳗鲡 (Anguillannguilla)外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑 (MIT)法的实验条件。结果表明，在培养时间为42～90h， 培养温度分别为 15．0℃ 、20．0℃、25．0℃和 30．0℃时，细胞培养液中ConA质量浓度分别为 0、10ptg／mL、20ptg／mL和 30,／g／mL，鳗鲡血清质量分数分别为0、5％、10％和 15％时，淋巴细胞于20．0℃、含 10t*g／mLConA，10％鳗鲡血清的 RPMI1640细胞培养液中培养66h后可获得最好的淋巴细胞转化效果。方差分析结果显示，4个因素中仅鳗鲡血清水平 对淋巴细胞转化试验OD值具有极显著影响(P0．01)，而温度 、时问和ConA对其影响均不显著(P0．05)。本研究建立 的鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验条件为鳗鲡的细胞免疫建立了研究方法。[中国水产科学 ，2007，14(3)：403—411] 关键词：欧洲鳗鲡；淋巴细胞转化试验 ；mgw法 ；ConA；培养温度；培养时间；鳗鲡血清 中图分类号：Q959．6 文献标识码：A 文章编号：1005—8737一(20O7)03—0403—09 一 鱼类的特异性免疫包括体液免疫和细胞免疫两 。 近年来，许多学者分别用植物凝血素 (eRA)和 个方面，分别由B淋巴细胞和T淋巴细胞介导。淋 刀豆蛋 白A(Co~g)与从鸡、火鸡、鸭_4 j分离到的 巴细胞转化试验是检测动物细胞免疫水平的常见方 外周血淋巴细胞进行培养研究。结果表 明，培养温 法之一。然而，鱼类细胞免疫方面的研究较少，很少 度、时间、血清和 ConA浓度对体外培养的淋 巴细胞 被用作评价免疫效果的指标，一般对鱼类特异性免 转化影响较大。水产动物在此方面的研究较少， 疫水平的检测仅限于体液免疫的抗体水平测定…1。 Daly等 7j研究了不同丝裂原 (ConA，PHA，LPS)对 淋巴细胞转化试验是利用淋巴细胞与丝裂原在体外 鲑 (Salvelinusfontinalis)外周血淋 巴细胞转化试验 共同培养，此时，淋巴细胞的代谢和形态发生一系列 的影响。结果表明，10t~g／mL的ConA能有效刺激 变化，并进一步转化为淋 巴母细胞这一特性来反映 T淋巴细胞转化。Marial等 【j的研究表 明，鱼类淋 机体免疫状态的一种试验，可作为细胞免疫水平的 巴细胞的培养温度应略高于其养殖的环境温度。另 一 个测定指标_2j。其常用测定方法有形态学法、同 有研究表明，鱼类淋巴细胞的培养液中加入一定量 位素掺入 法 (H—TdR 掺人 法)、四 甲基 偶氮 唑 的灭活同源血清有利于其转化_91l。本实验分离 (MTT)法 。MTT法是根据转化的淋 巴母细胞线粒 欧洲鳗鲡 (Anguillaanguilla)外周血淋 巴细胞，在 体脱氢酶能切断MTT的四唑