小鼠诱导多能干细胞体外分化为心肌细胞实验研究.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2013, 35(6): 810–815 http ://www.cj DOI: 10.11844/cj cb.2013.06.0036 小鼠诱导多能干细胞体外分化为心肌细胞的实验研究 1 1 1* 1 1 1 2 2 熊挺淋 张丽莎 刘 涛 王浩宇 赵超美 周振宇 赵 霞 杨 梁 1 ( 南充市中心医院心内科· 川北医学院第二临床医学院, 南充637000; 2重庆市神经病学重点实验室, 重庆400016) 摘要 观察血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和维生素C对小 鼠诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSCs)体外分化为心肌细胞的诱导作用。采用直接 悬浮培养法使iPSCs形成拟胚体(embryoid bodies, EBs), 分别以VEGF和维生素C作为诱导剂, 自然分 化作为阴性对照组, 加入1%二甲亚砜诱导剂为阳性对照组。倒置显微镜下观察细胞生长情况, 记录 跳动的拟胚体出现的时间和数目, 计算心肌细胞分化率, 细胞免疫荧光检测心肌特异性蛋白cTnT的 β MHC 表达, RT-PCR检测心肌特异性基因 - mRNA的表达。在LIF条件下, iPSCs在饲养层上成集落状 生长; 未分化的iPSCs 中Oct-4及AKP呈阳性表达; 与自然分化组相比, 二甲亚砜、VEGF和维生素C均 能提高iPSCs的心肌细胞分化效率(P0.05); 分化的心肌细胞可自发搏动, 同时分化细胞中表达心肌 特异性蛋白cTnT以及心肌特异性基因β-MHC。VEGF和维生素C可以促进iPSCs向心肌细胞分化。 关键词 诱导多能干细胞; 血管内皮细胞生长因子; 维生素C; 诱导分化; 心肌细胞 Research of Mouse Induced Pluripotent Stem Cells Differentiate into Cardiomyocytes in vitro 1 1 1* 1 1 Xiong Tinglin , Zhang Lisha , Liu Tao , Wang Haoyu , Zhao Chaomei , 1 2 2 Zhou Zhenyu , Zhao Xia , Yang Liang 1 ( Department of Cardiology, Nanchong Central Hospital; The Second Clinical Medical College, North Sichuan Medical College, Nanchong 637000, China ; 2 Chongqing Key Laboratory of Neuro