乙型肝炎表面抗原基因植物高效表达载体构建.pdfVIP

中西医结合学报２００６ 年 １１ 月第 ４ 卷第 ６ 期 　 Journal of Chinese Integrative Medicine， November ２００６ ， Vol ．４ ， No ．６ · ６３９ · 乙型肝炎表面抗原基因植物高效表达载体的构建 １ ， ２ ２ １ 林炳英 ， 金志强 ， 李　 梅 （１ ．厦门华侨亚热带植物引种园国家植物引种隔离检疫基地， 福建厦门 ３６１００２ ；２ ． 中国热带农业科学院 热带作物生物技术国家重点实验室， 海南海口 ５７１１０１） ［摘要］ 　 目的：构建果实特异性启动子驱动的含乙肝表面抗原（hepatitis B virus surface antigen， HBsAg） 植物表达载体，进一步提高外源目的基因的表达量，为研制有效的转基因植物防乙肝病毒疫苗打下基础。 方法：将番茄果实特异性启动子基因２A１２ 和E８ ，分别插入到pBPFΩ７ 构建中间载体pB２A１２ 和pBE８ ；酶切 YEPHBs 载体中的 HBsAg 小蛋白，并插入到pB２A１２ 和pBE８ ，得到载体pB２A１２HBs 和pBE８HBs；将其 中“p３５S＋ ２ A１２ ＋ Ω ＋ HBsAgs ＋ Tnos” 片段和“p３５S ＋ E８ ＋ Ω ＋ HBsAgs ＋ Tnos” 片段分别亚克隆到 pCAMBIA１３０１ ，得到植物表达载体 pCAM２A１２HBs 和 pCAME８HBs。 测序鉴定 pCAM２A１２HBs、 pCAME８HBs 中的启动子和 HBsAg 片段。 最后将 pCAM２A１２HBs、pCAME８HBs 转化根癌农杆菌 EHA１０５ 。 结果：重组质粒用酶切鉴定均得到预期片段，pCAM２A１２HBs、pCAME８HBs 的测序结果正确。 结论：本实验成功构建了番茄果实特异性启动子和 CaMV３５S 组成型启动子共同驱动HBsAg 基因的植物表 达载体。 ［关键词］ 　 启动子；２ A１２ ；E８ ；乙型肝炎表面抗原； 植物 ［中图分类号］ 　 R５１２ ．６ ＋ ２ 　 　 ［文献标识码］ 　 A 　 　 ［文章编号］ 　 １６７２１９７７（２００６）０６０６３９０５ Constructionofaplant effectiveexpression vector containingthegeneof hepatitis Bvirussurfaceantigen 1 ， 2 2 1 BingYing LIN ， ZhiQiang JIN ， Mei LI （１ ．Xiamen Overseas Chinese Subtropical Plant Introduction Garden， National Plant Introduction Quarantine Base， Xiamen， Fujian Province ３６１００２ ，China；２ ． State Key Laboratory of Tropical Crops Biotechnology ， The Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences， Haikou， Hainan Province ５７１１０１ ，China） ABSTRACT 　 Objective： To construct a plant effective expression vector driven by a fruit specific promoter for the expression of hepatitis B virus surface antigen （HBsAg） ， to further improve the expression of exogenous gene in plant ，and to prepare for the development of an effective antihepatitis vaccine．Methods ： Tomato fruitspecific promoters’ gene 2A12 and E8 were respectively introduced to pBPFΩ 7 to form pB2A12 and pBE8． The DNA fragment containing HBsAgs gene from plasmid YEPHBs was inserted respectiv