实验二、培养基制备及消毒与灭菌.pptVIP

* 《基础生物学实验》精品课程 实验八　蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察 1 1 实验八　蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察 【目的要求】 掌握动物组织平铺片和血涂片的一般制作方法 1 【基本原理】 　　肠系膜的间皮和肠系膜内的毛细血管内皮是观察单层扁平上皮的较好材料。 血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，在医学临床上应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值。 　　本实验分别采用铺片法和涂片法，将蛙肠系膜的单层扁平上皮组织及蛙血的结缔组织制备成玻片标本，在显微镜下观察这些组织的形态结构。 实验八　蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察 1 【仪器、材料与试剂】 生物显微镜、解剖器具（镊、剪、针）、蜡盘、载玻片、盖玻片、注射器、染色缸、玻片架、大头针、脱脂棉 活蛙或蟾蜍或牛蛙 0.7%生理盐水、1%硝酸银溶液、甲醇、乙醚、姬姆萨染液、蒸馏水、甘油 实验八　蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察 1 【方法与步骤 】 实验八　蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察 (一)肠系膜平铺片(单层扁平上皮) 1制作蛙的肠系膜平铺片 　　将活蛙置于放有乙醚棉球的倒置烧杯内，使之被麻醉致死，或将蛙剪头杀死。将蛙仰卧于蜡盘中，用大头针固定四肢，剪开腹部皮肤和腹壁，用镊子取下小肠处肠系膜少许。若有血液污染，可用0.7％生理盐水洗净后放在一载玻片上，用解剖针将其挑开展平，晾干。加数滴1％硝酸银水溶液于肠系膜上将其浸盖，立即放在日光下晒3～5min，或在灯光下照射10～20min。当肠系膜变成浅褐色时，倾去载玻片上的溶液，用蒸馏水缓缓冲去残留染液，再加1～2滴甘油，盖上盖玻片。 2单层扁平上皮表面观 1 【方法与步骤 】 实验八　蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察 (二)蛙血涂片标本的制备与观察 1 血涂片的制备 ①解剖蛙，剪开心包膜，暴露心脏。用注射器吸取蛙心血液，滴1滴在洁净载玻片右端，血滴不宜过大。 ②另用一载玻片作为推片之用，将此推片的末端斜置于第一块载玻片上的左缘，并稍向右移，接触血滴，使血液散布在2片玻片之间。将推片以30o～40o角度迅速向左方匀速推进，从而在玻片上留下薄而均匀的血膜，就成了血片。 推进时应保持一定的速度和两片间的角度，要连续推进，不要中断。血片的厚薄，可由血滴大小，推片速度和两片之间的角度大小来调节。血滴小，推进速度慢，推片角度小，涂片薄；反之，则厚。厚的涂片适于做白细胞分类，因为容易找到白细胞。 1 【方法与步骤 】 实验八　蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察 (二)蛙血涂片标本的制备与观察 1 血涂片的制备 ③摇动涂有血膜的玻片，使之尽快干燥，避免细胞皱缩。晾干后的血涂片放入盛有甲醇的染色缸内，固定3~5min。将固定后的血涂片平放在玻片架上，滴加姬姆萨染液8~10滴，以盖满血膜为宜，染色10～30min。然后在染色玻片的一端用自来水细流缓缓冲去染液，斜立血涂片于空气中，晾干后置显微镜下观察。 2蛙血涂片的观察 在低倍镜下选择分布均匀的血细胞，换高倍镜观察。蛙红细胞呈椭圆形，中央有一椭圆形细胞核，呈蓝色，细胞质呈红色。此外还可见到白细胞和血小板。 1 注意事项 完好地剪取肠系膜并平铺于载玻片上是本实验成功的关键。当用眼科剪剪取肠系膜时，应用镊子夹住剪开的膜的边缘，防止膜皱缩成团。用镊子将膜放置于载玻片上后，再用解剖针将膜铺平。 涂血片后，及时晃动玻片，使血片迅速干燥即固定；空气中干燥时间过长细胞易变形，影响观察和测量。 推片时应保持一定的速度和两片间的角度，连续推进，不要中断，以免血片厚薄不一。 实验八　蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察 1 【思考与练习】 实验八　蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察 1 绘蛙单层扁平上皮，并注明图中各部分名称。 2 试述血液涂片的制作要点。 1 实验八　蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察