全内反射瞬逝场照明高精度磁镊及其在DNA解旋酶研究中的应用.pdfVIP

全内反射瞬逝场照明高精度磁镊及其在DNA解旋酶研究中的应用.pdf

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物理学报 Acta Phys. Sin. Vol. 62, No. 16 (2013) 168703 全内反射瞬逝场照明高精度磁镊及其 在DNA 解旋酶研究中的应用* 王爽 郑海子 赵振业 陆越 徐春华† ( 中国科学院物理研究所, 软物质物理重点实验室, 北京凝聚态物理国家实验室, 北京 100190 ) ( 2013年4月3 日收到; 2013年4月15 日收到修改稿) 传统磁镊的测量精度受限于磁球的布朗涨落, 当磁力小于约10 pN 时, 磁球的布朗涨落明显增大, 对应磁镊的空 间分辨率显著下降. 为了提高传统磁镊在小力条件下的测量精度, 本文将全内反射荧光技术引入到磁镊技术中, 并 建立相适应的“磁球- 手柄- 荧光微球- 待测生物分子” 单分子连接系统, 在小力条件下(小于10 pN) 获得纳米量级 的测量精度. 应用改进的磁镊对DNA 发卡的折叠- 去折叠态的转变过程进行了研究, 依据DNA 发卡的折叠- 去折 叠态转变的性质对全内反射场的穿透深度进行了校正, 并结合实验结果对改进后的磁镊的测量精度进行分析. 观察 了Bloom 解旋酶的解旋动力学过程, 获得初步实验结果, 证实了改进的磁镊在单分子研究中的实用性. 关键词: 磁镊, 全内反射荧光, DNA 发卡, 解旋酶 PACS: 87.80.Nj, 82.37.Rs, 87.15.H, 87.15.kj DOI: 10.7498/aps.62.168703 效率, 并且施力范围在0.01—100 pN 之间, 满足大 1 引言 部分生物单分子的实验要求. 但磁镊测力的精度受 限于磁球的布朗涨落, 磁力较大时(10—100 pN), 磁 生物单分子技术在过去的二十年内发展迅速, 球的布朗涨落较小, 磁镊的精度较高, 这适合于研 不断为生命过程的动力学研究注入新的活力. 生物 9 究DNA 的B-S 结构相变的情况 ; 磁力较小时(约 单分子技术可以分为单分子操纵技术和单分子荧 10 pN 以下), 磁球的布朗涨落明显增大, 磁镊的精 光技术, 常用的单分子操纵技术有磁镊、光镊和原 子力显微镜等1−6 ; 常用的单分子荧光技术有荧光 度显著降低, 限制了磁镊在力较小(约10 pN 以下) 情况下的应用. 图1 给出了传统磁镊的示意图, 采 共振能量转移(FRET)、共聚焦显微、全内反射荧 78 用“磁球-DNA” 连接的平板样品池放置在高倍物 光等 . 这些技术被广泛地应用于DNA 和蛋白质 等生物大分子的生命过程的研究中. 相对于其他生 镜的上方, 磁铁放置在平板样品池的另一侧, 对样 物单分子技术而言, 磁镊技术提供了一种简单的拉 品施加磁力, 进行单分子力学操纵. 伸和扭转生物分子的方法, 以及大小恒定的力, 可 按文献[11], 磁镊的空间测量精度有如下表述: 以用于DNA 的弹性性质测量和DNA- 蛋白质相互 2 kB T 作用的动力学研究中910 . 磁镊分为纵向磁镊和横 ⟨δx ⟩ α

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