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2013-10-25 DOI: 10.3724/SP.J.1145.2013.00822 /
Chin J Appl Environ Biol 2013 19 ( 5 ) : 822-826
应用与环境生物学报 ，
厌氧梭菌表达载体在大肠杆菌中的
直接表达及活性筛选*
1, 2 1, 2 1, 2 2 1, 2 1, 2**
刘春宇 陈燕 黄金群 裴建新 庞 浩 黄日波
1
（广西大学生命科学与技术学院 南宁 530005）
2
（广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心 南宁 530003）
摘 要 厌氧微生物的代谢途径改造、重组基因表达等分子生物学操作步骤多，易造成氧气接触，从而导致厌氧微生
物死亡. 针对厌氧梭菌-大肠杆菌穿梭载体的构建和筛选问题，利用纤维素内切酶基因Cphy3367作为报告基因，分析
穿梭载体的硫解酶启动子在大肠杆菌中启动基因转录表达的可能性. 含有重组质粒pSOS95-Cphy3367的大肠杆菌菌株
相对于对照菌株生长迟缓，生物量降低 . 实时定量PCR检测及重组蛋白酶活检测结果中，发现硫解酶启动子在大肠杆
菌中能启动基因转录表达，在37 ℃温度下48 h后达到高峰 . 表明硫解酶启动子在大肠杆菌中可以被宿主识别和启动基
因表达，基因可以翻译成为蛋白质. 在厌氧梭菌的穿梭载体构建中，含有硫解酶启动子的载体可以在大肠杆菌中进行
重组载体的活性筛选这个步骤，从而降低梭菌厌氧操作的复杂度和难度. 图4 表 1 参24
关键词 厌氧梭菌；硫解酶启动子；大肠杆菌；重组表达 ; 纤维素酶；菌株筛选
CLC Q936 : Q78
Direct Construction and Screening of the Expression Vector of
Anaerobic Clostridium in Escherichia coli *
1, 2 1, 2 1, 2 2 1, 2 1, 2**
LIU Chunyu , CHEN Yan , HUANG Jinqun , PEI Jianxin , PANG Hao & HUANG Ribo
1
( Life Science and Technology College, Guangxi University, Nanning 530005, China)
2
( National Engineering Research Center for Non-food Biorefinery, Guangxi Academy of Sciences, Nanning 530003, China)
Abstract The complex procedures of molecular biological experiments with anaerobic microbes, such as reconstruction of
metabolic pathway and expression of the recombinant gene, would introduce oxygen easily, which may result in death of the
anaerobic microorganisms. This study was ai
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