亲和柱色谱原位酶切法纯化重金属镉结合的金属硫蛋白.pdfVIP

!# 年$ 月 色 谱 $%’ !% (%’ !# !# !#$%% ’()*$+, (- !*(.+/(0*+1 2 !’( ) !* 亲和柱色谱原位酶切法纯化重金属镉结合的金属硫蛋白!! 郑伟娟，- 杨- 锋，- 吴- 芳，- 陆- 纯，- 华子春 （南京大学生命科学院 医药生物技术国家重点实验室，江苏 南京 ! +( ） 摘要：按照人金属硫蛋白) （2!*) ）的基因序列，选用大肠杆菌偏爱的密码子合成了全长 2!*) 基因，并将其插入 大肠杆菌融合表达质粒:;,= 的多克隆位点中，在谷胱甘肽) 硫) 转移酶（?* ）下游与 ?* 融合表达。通过异丙 基)! ) @) 硫代半乳糖苷（AB* ）诱导在大肠杆菌表达菌株 8! +（@, ）#C? 中表达了与重金属离子镉结合的融合蛋 白?*) D6! . ) 2!*) 。经十二烷基硫酸钠) 聚丙烯酰胺凝胶电泳（?@?) B; , ）分析表明融合蛋白主要在超声上清 液中。分别通过“先纯化、后酶切”和“亲和柱色谱原位酶切”两种方法纯化了 D6! . ) 2!*) ，比较了两种方法的纯 化效率和得率，表明原位酶切法操作简便，较之“先纯化、后酶切”法减少了洗脱、透析、冻干等步骤，从而也减少了 样品的损失，提高了样品的纯度和得率。从摇瓶培养菌液中纯化获得了结合有 D6! . 的完整的人金属硫蛋白) ，得 率为 +’ *E 。氨基酸组成分析结果表明所获得的D6! . ) 2!*) 不含芳香族氨基酸和组氨酸，符合金属硫蛋白的特 征；直读电感耦合等离子体发射光谱分析其硫镉原子比为! +/ （’0 $ 1 0 + ），与理论值! +/ ’ 基本吻合。 关键词：亲和柱色谱；人金属硫蛋白) ；融合表达；F7G%H = 原位酶切；纯化 中图分类号：I#$*- - 文献标识码：;- - 文章编号：+)*’ + （!# ）)!’()$- - 栏目类别：研究论文 #$%%’()%*+ * ,(-.%#. /*+ 0%+-%+1 23)(44*)5%*+3%+!! 67 $*)3%+(83 9%138)%*+ *+ :%+%)7 ,5$*.()*1$(;5%’ ,*4#.+ JK,( L+.0 53 ，M;( F+34 ，LN F34 ，N D253 ，KN; J.7253 （! #$ % $ ’ #()*#)* )+ , -#*. #/$0 1/#2 3 1)$/-4)2)5 ，!/-))2 )+ ’ 1+ $ !/1$4/$ ， 6 #47 145 8419$*:1 ，6 #47 145 !##$% ，;-14# ） :68)$(’) ：*2+ 4+3+ +37%6.34 25-3 -+G%G2.%3+.3) （2!*) ）/C C#3G2+C.1+6 36 .3C+HG+6 .3G% G2+ :%#) 7%3.34 C.G+C %O O5C.%3 +P:H+CC.%3 Q+7G%H :;,= ，36 O5C+6 6%/3CGH+- G% .GC 45) GG2.%3+ ?)GH3CO+HC+ （?* ）O5C.%3 :HG3+H’ F5C.%3 :H%G+.3 ?*) D6! . )2!*) /C +P:H+CC+6 OG+H .C%:H%:#)! ) @)G2.%47G%:#H3%C.6+ （AB* ）.3657G.%3 36 66.G.%3 %O ’ + --%R D6?I%