基因文库课件.pptVIP

基因文库是指包含了一个生物细胞中全部DNA序列的片段与载体连接构成重组DNA分子经转化宿主细胞后所形成的克隆群体。 应用DNA重组技术，可以将各种生物体全部基因的遗传信息，贮存在可以长期保存的稳定重组体中，以备需要时应用。好象将文献资料贮存于图书馆一样，所以称其为genomic library。 基因文库分两类： 基因组文库（genomic DNA library）G-库 cDNA文库（cDNA library）C-库 基因组DNA文库构建的程序 ①载体DNA的制备； ②高纯度大相对分子质量基因组DNA的提取和大片段的制备； ③高纯度大相对分子质量基因组DNA的部分酶切与脉冲电泳分级分离； ④载体与外源片段的连接与转化或侵染宿主细胞； ⑤重组克隆的挑选和保存。 构建基因组文库的载体系统 按功能载体分： 克隆载体 (cloning vector) 　表达载体 　(expression vector) 构建基因组文库的载体系统 根据插入DNA片段的大小，来选择载体。 基因组文库的构建 克隆原理及基本步骤 1．通过细菌培养增殖载体、回收、纯化载体 2．基因组DNA的制备 3．连接：分别酶切载体与外源DNA ，再连接 4．包装 ?溶原菌株(BHB2688+BHB2690) 5．感染宿主细胞/铺平板 6．筛选某个DNA片段： 嗜菌斑原位杂交