N端焦谷氨酸环化封闭类单克隆抗体药物的N端测序方法.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（８）：７３８０ Ｎ端焦谷氨酸环化封闭类单克隆抗体 药物的Ｎ端测序方法 李明珠　韩伟东　邢光慧　滕珍林　薛国梅　侯辰瑞　阮宏强　陈　薇 （中国科学院上海生命科学研究院蛋白质组学分析研究中心／上海中科新生命生物科技有限公司　上海　２００２３３） 摘要　目的：对于直接用Ｎ端测序仪无法进行测序的Ｎ端焦谷氨酸环化封闭的抗体类药物，去除 焦谷氨酸后实现对其Ｎ端序列的从头测序。方法：对抗体的重轻链分别进行Ｎ端测序无果，再通 过ＬＣＭＳＭＳ对其重轻链Ｎ端的焦谷氨酸进行确认，证明其为焦谷氨酸封闭。对抗体蛋白进行焦 谷氨酸氨肽酶酶解后，再通过Ｎ端测序仪进行Ｅｄｍａｎ降解法Ｎ端测序，获得抗体药物重轻链的Ｎ 端氨基酸序列。结论：抗体药物的重轻链 Ｎ端经过 Ｎ端测序仪测序和 ＬＣＭＳＭＳ分析，确定均为 焦谷氨酸封闭。再经过焦谷氨酸氨肽酶处理后进行Ｎ端测序仪从头测序证实抗体药物的Ｎ端序 列与理论序列一致。 关键词　单克隆抗体　焦谷氨酸环化　Ｅｄｍａｎ降解　Ｎ端测序　ＬＣＭＳＭＳ 中图分类号　Ｑ７８ 　　单克隆