蜡梅花cDNA文库构建及其高频出现脂转移蛋白cDNA的表达.pdfVIP

中国农业科学 2007, 40(3):644-648 Scientia Agricultura Sinica 蜡梅花cDNA文库构建及其高频出现脂转移蛋白cDNA的表达 眭顺照，李名扬，蒋 安，王 洋，秦 华，皮 伟，任 琛 （西南大学园艺园林学院, 西南大学花卉研究所，重庆 400716 ） 摘要：【目的】构建蜡梅花cDNA文库，分析蜡梅脂转移蛋白基因的表达，为探索蜡梅冬季开花分子机理，分 离克隆特色基因奠定基础。【方法】以蜡梅花器官为材料，用SMART cDNA Library Construction Kit 构建文库， RT-PCR 分析基因表达。【结果】经测定原始文库滴度达到 1.4×106 10 pfu/ml，扩增总文库滴度约为 10 pfu/ml，重 组率达到96%，插入片段在0.5 kb 以上，平均约1.1 kb，通过PCR 检测，从总文库中检测到了表达丰度不同的 蜡梅 PI、AP3 和 LTP 基因的特异片段，说明所构建的文库覆盖度高、代表性强，LTP 基因具有内含子，而总文库 中扩增出的 LTP 基因不含内含子，说明所构建的 cDNA 文库无基因组 DNA 污染， LTP 基因在蜡梅开花各个时期均 表现较高的转录水平，与 EST 分析时高频率出现 LTP 序列的情况相符，证实所构建的文库能够反映蜡梅开花过程 基因表达的基本情况。【结论】已获得高质量的蜡梅花 cDNA 文库，可以用于进一步的基因克隆或 EST 测序分析， 这是首次正式报道蜡梅cDNA 文库的构建。LTP 基因在蜡梅开花过程中可能具有重要的生物学功能，为探索蜡梅冬 季开花分子机理提供了线索。 关键词：蜡梅；cDNA文库；脂转移蛋白基因；RT-PCR Construction of Chimonanthus praecox Flower cDNA Library and Expression Analysis of High-Abundancy cDNA of Lipid Transfer Protein (LTP) SUI Shun-zhao, LI Ming-yang, JIANG An, WANG Yang, QIN Hua, PI Wei, REN Chen (College of Horticulture and Landscape, Institute of Ornamental Research,Southwest University, Chongqing 400716) Abstract ：【Objective 】The study was conducted to construct the cDNA library of Chimonanthus praecox flower and analyze the expression of LTP cDNA. 【Method 】The cDNA library was constructed from flowers of Chimonanthus praecox, using the SMART cDNA library construction kit. The expression of LTP cDNA was analyzed through reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). 【Result 】The primary library has a high titer of 1.4×106 pfu/ml, in which 98% clones are recombinant and the insert cDNAs are more than 0.5 kb, with an average of 1.1 kb. The amplified library has