体细胞克隆的小鼠胚胎在附植前后发育的研究.pdf

维普资讯 · 32 ·试验研究 广东畜牧兽医科技 2008年 (第 33卷)第5期 体细胞克隆的小鼠胚胎在附植前后发育的研究 彭礼繁 ，罗光彬 ，PhilipIannaccone。，陈自洪 。 (1．沈阳农业大学动物胚胎工程实验室，沈阳 辽宁 110161；2．美国西北大学医学院儿科系，芝加哥 美国：3．广西大学动物繁殖研究所，广西 南宁 530005) 摘 要：采用成年小鼠的卵丘细胞核、胎儿成纤维细胞作核供体细胞来进行核移植，研究小鼠卵母细胞 的去核程序和影响重构胚附植前发育的激活条件；随后将重构胚与供体细胞系共培养后获得囊胚阶段的小 鼠重构胚，并将其移植到受体鼠体内后获得 了24％克隆胚胎。结果表明，小鼠卵母细胞质能够进行重编程 来支持旱期的胚胎发育。 关键词：克隆；胚胎培养；核移植；小鼠 中图分类号 ：S814．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—8567(2008)05—0032—05 目前，大多数研究在胚胎干细胞中采用同源 购 自大连医科大学实验动物中心，合格证号：SCXK 受体来进行基因敲除，以研究其基因功能_1，。创 (辽)2004—0017；普通级近交系 615雌 鼠，本实验 造功能突变性缺失的同源受体，在大 鼠中已普遍 室饲育。 ’ 使用，但在其他哺乳动物上还没有得到应用，尤其 1。1．2 主要仪器设备 拉针仪 (PUL—1)、锻针仪 是在小鼠上[2]。先天性突变 的小鼠是人类疾病的 (MF-900)、电融合仪 (BTX一830)、芯入哨子管 重要模型[3]。使用小鼠作为动物模型来进行的基 (G-100)，均为 日本Narishiage生产；荧光显微镜 因研究，已经在活跃的染色体组织中得到 了证实 (VANOX一1000)、生物 显微镜 附显 相系 统 (JVC [4] 。 小 鼠模型基因研究中的主要限制性因素是，难 KY一1900E)、实体生物显微镜 (M37610—26)，均为 以制造 出功能突变性缺失的同源受体 (基因克 OLYMPUS生产。C02培养箱 (BB506OUV，香港)；倒置 隆)。迄今，小鼠的胚胎干细胞还无法产生出生殖 显微镜及显微操作系统 (DMIRB，德 国Leica公 系嵌合体，因此就无法进行基因敲除。 司)；电子天平 (BS210S，德 国赛多利斯公司)；生物 目前，用胚胎干细胞来生产克隆后代，主要是 超净工作台(BCM一1000，中国江苏苏净集团安泰公 将培养过的细胞核转移入去核的卵母细胞中，并让 司)；酸度计 (AI9—0031—10，美 国ORION公司)；多 这种重构胚在体外发育嘲，进而获得经过基因修饰 管架 自动平衡离心机 (TDZ5一WS，湘仪离心机有限 的克隆动物。导入突变基因的供体核经核移植也能 公 司 )；立 式 自动 电热 压 力 蒸 汽 灭 菌 器 得到具有相同的突变基因的后代。在一些物种中提 (LEZX一40BI，上海 申安医疗器械厂)；自动三重纯 供供体核的细胞通常是经过培养的细胞，用这种方 水蒸馏器 (SZ一97，上海亚荣生化仪器厂)。 式可以生产基因敲除克隆动物嘲，而要达到这个 目 1．1。3 药品与试剂 M2、MI6、KSOM、透明质酸酶、 标首先要生产出核移植小鼠。已报道的小鼠核移植 胰酶、EDTA、Hank S缓冲液、胎牛血清 (FBS)、 多采用小鼠胚胎 中卵裂球的细胞核忉，随着小鼠基 DMEM(高糖)、G-418、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)等，均 因敲除技术的发展，目前又采用其他大量的细胞或