喜树多倍体诱导研究.pdfVIP

维普资讯 第27卷 第3期 成都大学学报(自然科学版) VoI．27 NO．3 2008焦 9H JournalofChengduUniversity(NaturalScienceEdition) Sep．2008 文章编号：1004—5422(2008)03—0177—04 喜树多倍体诱导研究 王跃华，胡水君，张海强，韩海洋，尹国胜 (成都大学 生物产业学院，四川 成都 610106) 摘 要：为改良喜树现有品种，丰富遗传育种资源，采用秋水仙素对植物喜树的顶芽和种子进行多倍体诱变处 理，经植物形态学检测，诱导后的对象具有明显的多倍体特征，表明采用秋水仙素对喜树不同部位进行多倍体 诱导，是一种行之有效的生物技术方法． 关键词：喜树；多倍体；诱导 中图分类号：Q813．4 文献标识码：A 具有 s型手性碳的a．羟基 内酯环．研究表明，在喜 O 引 言 树碱的E环结构中，在其 20位上的手性碳为S构 喜树 (CamptothecaAcuminataDecsne)属梧桐科 型，喜树碱才具有活性，若手性碳为 R构型时，喜 (Nyssaceae)旱莲属植物，落叶乔木，分布于我国长 树碱则没有活性l4】．采用化学的方法合成喜树碱 江流域及西南各省和印度部分地区，我国台湾、广 时，最后的产物为20(S)一喜树碱和2o(rt)一喜树 西等地也有栽培．1966年美国MonroeE．Wall等人 碱的混合物，即产物是消旋物，且在化学合成过程 从喜树的皮中分离出喜树碱(Camptothecin，cer)和 中，化学反应步骤多，导致产率较低，因此采用化 极微量 的 l0．甲氧基喜树碱 (10一Me~oxycampto． 学合成的方法制约了喜树碱大量地工业化生产． thecin)，经实验证明，这种色氨酸萜烯类生物碱具 本课题采用生物技术中的多倍体诱导的方法，旨 有抗癌活性…，该生物碱在体外对 Hela细胞和 在培育喜树碱高产的喜树新品种，以解决喜树碱 L1210细胞显示较强的抗癌活性，引起了人们广泛 短缺的问题 ． 的关注，尤其是进入上世纪 9o年代后 ，美 国、日 1 材料与方法 本、加拿大和英国等积极投入大量的人力、物力进 行喜树碱的研究与开发，使喜树成为继红豆杉之 1．1 材 料 后第二个重要的木本抗癌药用植物． 喜树枝条和种子采于成都大学校园内栽种的 现代临床试验表明，cPI’及其类似物对膀胱 喜树．选取生长健康、无病虫害的喜树枝条和种子 癌、脑癌、乳癌、宫颈癌和肝癌等3O余种肿瘤都有 为供试外植体． 不同程度的疗效l2j．喜树碱的抗癌活性主要影响 1．2 方 法 DNA链再连接反应，即 CVI与 TopoI和切 1：3的 采用多倍体诱导方法对喜树枝条和种子进行 DNA结合形成 CPT-TopoI．DNA复合物，该复合物 处理 ． 很稳定，使断裂的DNA堆积．当DNA复制叉进一 1．2．1 不同浓度的秋水仙素溶液处理喜树顶芽． 步复制时，复制叉和 CPT-Topo工．DNA复合物碰 挑选生长健壮含顶芽的喜树枝条共 120枝， 撞，造成双链 DNA断裂，导致不可逆的DNA复制 分成 6组，每组 20枝，分别记为 A1、A2、A3、A4、 停滞，最后导致细胞死亡 ]． A5、A6．A1作为对照组，其他5组的喜树顶芽分别 喜树碱分子为五环结构，有吡咯喹啉环、共轭 用不同浓度的秋水仙素溶液