复件 研究生分子生物学3--蛋白质研究技术.pptVIP

蛋白质研究技术 蛋白质的分离纯化 第一节、蛋白质的分离纯化 一、蛋白质的理化性质 蛋白质的两性电离 蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。 蛋白质的等电点( isoelectric point, pI) 当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。 蛋白质的胶体性质 蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自1万至100万之巨，其分子的直径可达1～100nm，为胶粒范围之内。 * 蛋白质胶体稳定的因素 颗粒表面电荷 水化膜 若去除这两个因素，蛋白质极易从溶液中析出。 蛋白质的紫外吸收 由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白质定量测定。 二、蛋白质的分离纯化方法 透析(dialysis) 利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。 丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀 *丙酮沉淀: 低温进行，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。 *盐析(salt precipitation)：将硫酸铵、硫酸钠或