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急性淋巴细胞白血病患儿血小板蛋白质组学研究 摘 要 目的 急性淋巴细胞白血病（ALL ）是儿童时期最常见的血液系统肿瘤，出 血是常见症状及死因之一，引起出血的机制复杂，其中最主要原因是血小 板减少。ALL 患儿血小板数量减少的同时，可能存在其功能异常。目前关 于ALL 患儿血小板功能的研究较少，其对出血影响的机制尚不完全清楚。 本实验旨在应用血小板蛋白质组学技术分析儿童 ALL 状态下血小板蛋白 质差异表达，并对这些差异表达蛋白质进行进一步的研究和筛选，以期寻 找到ALL 患儿血小板功能相关的血小板特异性蛋白质，探讨ALL 时血小 板功能异常的分子机制，以便早期采取积极措施干预ALL 患者的出血，从 而改善预后。方法 应用蛋白质芯片CM10 及表面激光解吸电离飞行时间质 谱技术（SELDI-TOF-MS ）技术获得ALL 患儿27 例 （ALL 组）、ALL 诱 导缓解治疗达到完全缓解患儿25 例 （ALL-CR1 组）及正常对照组27 例的 整套血小板蛋白质谱，采用Ciphergen 公司Biomarker Wizard 和Biomarker Pattern System5.0 软件对蛋白质谱进行差异蛋白分析，筛选出有显著差异的 蛋白质。结果 (1)在质荷比2000～20000 范围内，ALL 组与正常对照组比 较血小板质谱中有176 个差异表达的蛋白质峰（p ＜0.05 ），高表达有25 个， 低表达有 151 个。其中存在稳定表达且变异系数小的蛋白质峰有9 个：包 括高表达2 个，荷质比（M/Z ）分别为2496.9 和4287.9 ；低表达7 个，荷 质比（M/Z ）分别为7881.2、4091.3 、3149.9、2365.1 、9414.1、5252.3、2280.7 。 (2)ALL 组与ALL-CR1 组比较血小板质谱中有 112 个差异表达的蛋白质峰 1 （p ＜0.05 ），其中高表达有 15 个，低表达有97 个，存在稳定表达且变异 系数小的蛋白质峰有6 个：包括高表达2 个，荷质比（M/Z ）分别为2496.9 和4287.9 ；低表达4 个，荷质比（M/Z ）分别为9414.1、7881.2、3149.9、 2280.7 。(3)ALL-CR1 组与正常对照组比较，未出现具有统计学意义的高表 达蛋白质峰 （p ＞0.05 ），但仍有69 个显著低表达的蛋白质峰 （p ＜0.05 ）。 (4)数据库分析ALL 组与正常对照组显著差异的 9 个蛋白质峰，表达上调 的两种蛋白分别为内皮素-1 和大内皮素-1，表达下调的蛋白为血小板第四 因子、凝血酶轻链、垂体腺苷酸环化酶多肽27 、纤维蛋白原β 链和三种未 知蛋白，这些蛋白质可能与血小板信号转导、粘附、聚集及活化等功能相 关。结论 (1) ALL 患儿与正常对照组外周血血小板蛋白质组学水平有显著 差异；(2)ALL 组与ALL-CR1 组间血小板蛋白质组学水平也存在显著差异， 经诱导缓解治疗达完全缓解后异常表达的蛋白数目明显减少，但与正常比 较仍有一部分蛋白呈显著低表达。(3)ALL 患儿血小板功能可能存在异常， 主要表现为细胞信号转导障碍、聚集和活化能力降低及凝血功能异常等方 面；(4)本研究为ALL 发病及治疗过程中血小板功能的监测提供了新途径。 关键词 急性淋巴细胞白血病；表面激光解吸电离飞行时间质谱;血小板； 蛋白质组学 2 A study by platelet proteomics technology in childhood acute lymphocytic leukemia Abstract ：Objective Acute lymphocytic leukemia(ALL) is one of the most common hematological malignancies in children, the bleeding complications are very common in acute leukemia and often lead to death. The mechanism of bleedi