碱性蛋白酶水解米糠蛋白动力学特性研究.pdfVIP

2012年 12月 中国粮油学报 Vo1．27，No．12 第27卷第 12期 JournaloftheChineseCerealsandOilsAssociation De 2012 碱性蛋 白酶水解米糠蛋 白动力学特性研究 翟爱华 李新华 (沈阳农业大学食品学院 ，沈阳 110866) (黑龙江八一农垦大学食品学院 ，大庆 163319) 摘 要 研究蛋 白酶水解制备生物活性多肽反应机制与动力学行为，基于经典的米氏方程理论，应用数 学推导结合试验研究的方法，以米糠蛋 白为原料，对米糠蛋 白一碱性蛋 白酶体 系进行酶解动力学研究。考虑 蛋白质单底物水解、蛋白酶失活的机理模型，构建动力学模型R=aexp[一b(DH)]，其中对参数a值和b值进 行确定。利用Origin8．0软件，对推导出的公式进行拟合得到水解速率动力学模型为R=(94．754e一0．0597 s0)exp[一0．157(DH)]，水解度 一水解时间的动力学模型：DH=6．371n【1+(14．88e0／s。一0．009)t]。对于米 糠蛋白一碱性蛋白酶模型体系，经试验拟合，并求得该体系动力学常数：酶失活常数 为16．144min～，酶解 反应速率常数k为94．754min～。 关键词 米糠蛋白 碱性蛋白酶 动力学特性 中图分类号：TS201．2 文献标识码 ：A 文章编号：1003—0174(2012)12—0001—05 蛋白酶酶促水解是在酶的催化作用下使蛋白水 为了模拟动力学反应行为，试验 以米糠蛋 白一 解生成胨、肽等低分子质量产物的生化过程。酶促 碱性蛋 白酶为模型体系。以米糠蛋 白为原料主要是 水解动力学主要是研究酶促水解速度与其影响因素 米糠约含粗蛋白13％，榨油后的米糠含粗蛋白16％， 之间的内在规律，在众多相关研究中，有关蛋 白酶促 米糠蛋白因其均衡的氨基酸组成、疏水性氨基酸和 水解动力学的研究始终是一个重要方面。酶解动力 芳香族氨基酸的比例 占总氨基酸含量的50％左右， 学是蛋白酶评价与筛选的依据之一；其次，酶解动力 生物利用高和抗营养因子低而被作为是植物蛋白的 学是反应机理研究的常用手段；再其次，为解决工业 重要来源_6j。米糠蛋白一碱性蛋白酶酶解体系，常 反应器的选型及设计计算提供必需的理论依据；最 用来水解制备活性多肽，如抗氧化肽、降血压肽、免 后，为工业装置的优化操作提供理论指导…。该项 疫多肽等，各种活性肽酶促水解均为可控酶解过程， 生物技术已有几十年的研究历史，但酶解过程复杂， 即不同的反应条件，水解度获得的功能性肽活性不 因此动力学规律研究报道较少，而米 氏方程难以描 同。因此，研究米糠蛋白一碱性蛋白酶模型体系具 述反应全程 。 有重要的理论研究和实际应用价值。试验采用从反 近年来，国内外已开展了相关的蛋白质酶解的 应机理出发，并结合试验分析的建模思路，在不同的 动力学研究，主要集中在 以大豆蛋 白为主的植物蛋 试验条件的酶解过程，构建了动力学方程，模拟反应 白以及以乳蛋 白和血红蛋 白为主的动物蛋白。例 进程 。 如，齐伟等_3研究了以血红蛋白为底物的碱性蛋白 酶催化水解的动力学模型；赵利等 研究了酪蛋白 1 材料与方法 的水解特性；PGonzhlez—Tello等 以乳清蛋 白为底 1．1 主要材料与试剂 物，研究了 MPKPrptease660L、Alcalase0．6L和 米糠 蛋 白：北大荒希杰食 品科技公司，置 于 PEM2500S等3种酶促水解的动力学模型。 一 2O℃冷藏备用。碱性蛋白酶(Alcalase)：活力2．8× 基金项 目：高端配方米加工及副产物综合精深加