谷氨酸棒杆菌argB基因的克隆及其在大肠杆菌中表达的初步研究.pdfVIP

基础研究 食品科学 2005, Vol. 26, No. 1 31 谷氨酸棒杆菌argB基因的克隆及其在 大肠杆菌中表达的初步研究 陈雪岚 许正宏 陶文沂 (江南大学教育部工业生物技术重点实验室 江苏 无锡 214036) 摘 要 根据GenBank报道的谷氨酸棒杆菌ATCC 13032序列 设计并合成一对引物 利用温度梯度PCR仪 获得了argB基因全长 将其克隆到pGEM-T-Easy载体中 经测序鉴定后定向克隆至表达载体pGEX-4T-1中 构 建了pGEX-argB表达质粒 关键词 谷氨酸棒杆菌 argB基因 克隆 表达 Analysis of the argB Sequence fromCorynebacterium Glutamicum and the Pilot Study on the Expression ofEscherichia colithe Gene in XU Zheng-hongTAO Wen-yi CHEN Xue-lan Wuxi 214036, China) Abstract GenBank about the sequence ofCorynebacterium glutamicum plasmid pGEX-4T-1. Key wordsCorynebacterium glutamciumargB genecloneexpression 中图分类号Q343.1 文献标识码A 文章编号 L-精氨酸(L-Arginine简称L-Arg)是一种非必需氨 易退化等局限性 DNA重组技术出现以后 人们开始 基酸 是生物体尿素循环的一种重要中间代谢产物 具 探索利用DNA重组技术调控L-Arg合成代谢途径 以 有多种独特的生理和药理作用 在正常情况下 机体 达到提高L-Arg产量的目的 能自身合成L-Arg但在饥饿 损伤 疾病 应急状 L-Arg的生物合成是通过细胞内的代谢网络进行 态及生长阶段时 机体对L-Arg的需求超过了自身合成 的 该代谢网络由众多的酶催化相互关联的一系列化学 的能力 因此及时补充外源性L-Arg有利于提高机体的 反应以及特异性的膜转移系统所构成 目前研究L-Arg 免疫能力 此外 研究发现L-Arg对氨中毒性肝昏迷及 生产的主要工程菌包括棒杆菌和短棒杆菌属 1996年 随着L-Arg-NO(一氧化氮)途径 [4] 病毒性肝炎有显著疗效 Sakanyan等 报导谷氨酸棒杆菌ATCC13032被Arg抑制 在临床上研究的不断深入 发现L-Arg还具有抗动脉粥 的关键酶是argB基因编码的乙酰谷氨酸激酶 此酶不仅 样硬化 防治高血压及心力衰竭等作用[13] 传统生产 被Arg反馈抑制亦被其反馈阻遏 是Arg生产过程中被 L-Arg的高产菌株大多采用诱变筛选的方法获得 但此 精氨酸抑制的唯一限速酶 2001年3月 谷氨酸棒杆 法有盲目性高 工作量大 且存在突变株生理失调 菌基因组全序列的公布及相关代谢网络调控机制的研 收稿日期 2003-09-09 基金项目 国家 十五 攻关项目(BE2001041) 作者简介 陈雪岚(1970-)女 博士 研究方向为生物工程 32 2005, Vol. 26, No. 1 食品科学 基础研究 究 为我们利用基因技术修饰 改造和设计Arg代谢 GGCGAATTCCGTGCTCATTTACAGTTCCC(下划线处 3 途径提供了良好