使用差示扫描量热仪测定抗冻蛋白热滞活性方法的研究.pdfVIP

生物物理学报 第二十四卷 第六期 二oo八年十二月 ACTA BIOP]HYSICA SINICA Vo1．24 N0．6 Dec．2008 使用差示扫描量热仪测定抗冻蛋白热滞活性方法的研究 张 超 ， 赵晓燕 ， 马 越 ， 张 晖z， 姚惠源 (1．北京市农林科学院蔬菜研究中心，北京 1o0O97； 2．江南大学食品科学与工程国家重点实验室，无锡 214122) 摘要：抗冻蛋白因具有独特的抗冻活性而被研究者广泛关注。但是，目前抗冻活性的检测没有一个标准的、 统一的检测方法，这严重制约了该方面的研究进展。作者详细研究了采用差示扫描量热仪测定样品热滞活性的方 法，并对该方法的稳定性、专一性和精密度进行评价。结果显示，采用差示扫描量热仪测定样品的热滞活性具有 较高的稳定性、重复性和精密度。因此，差示扫描量热仪法可以作为一种通用的方法进行抗冻蛋白热滞活性的 检测 。 关键词：抗冻蛋白；热滞活性；热分析；差示扫描量热仪 中图分类号：O33 0 引 言 AFP，DcAFP)的THA为 (0．0957±0．00368)℃，然 而其它文献报道的THA各不相同，Zllang s]使用 抗冻蛋 白 (anti丘eezeprotein，AFP)具有非 DSC法测定 DcAFP 的THA，认为 THA是与其浓 依数性降低体系冰点的作用，因此可 以通过测定其 度有关的，在 0～O．4℃之间，而WorraU等 9[】使用 热滞活性 (themalhvsteresisactivity，THA)来反 微量渗透压计测定其 THA活性为 0．35℃ fDcAFP 映AFP的抗冻活性。目前，THA检测方法主要有 浓度为 lm nL)，未详细介绍其它相关测定参数。 三种：显微镜观察法、微量渗透压计法和差示扫描 因此，深入研究测定方法和测定程序对样品THA 量热仪 (di毹rentialscanningcalom1e仃y，DSC) 的影响，并建立一个有效测定AFP热滞活性的标 法 】。显微镜观察法是用肉眼进行观察，主观性 准方法是十分必要的。 强，很难确定统一的标准，即使同一个人测定，也 目前 ，已经有不少研究者使用 DSC法测定 会存在较大误差刚。微量渗透压计法是根据体系结 AFP的THA【， 叫2J，但是都没有对其进行深入 的 晶前后的渗透压变化，通过经验公式来计算THA， 研究。本文以DcAFP为研究对象，使用DSC法测 它受体系溶液种类、浓度、冷台温度程序等影响， 定THA，对影响样品THA 的因素进行全面考察， 是 目前较常用的一种测定方法。在相同的测定环境 以建立一个有效测定THA的标准方法 。其中，主 中，微量渗透压计法测定结果的精确度和重复性都 要研究样品浓度、升降温速率、冰晶含量等因素对 较高，缺点在于无法精确控制和测定体系的冰晶含 样 品THA的影响，并考察了该方法的稳定性、重 量，不利于进一步揭示结晶过程中体系发生的变 复性和精确度。 化 6】。DSC法主要通过测定体系结晶过程中吸热 和放热的变化，检测体系发生的物理变化，确定真 1 材料与方法 实的结晶起始温度 ，进而获得 THA，测定结果更 加准确客观，而且 DSC法可 以精确测定体系的冰 1．1 DcAFP的纯化 晶含量 ，缺点在于检测花费的时间较长，需要高 参照Meyer 。】的方法从红萝 卜非原质体中纯 精度的设备 。 化DcAFP。 由于没有统一的、权威的THA测定方法， 目 前使用不同的检测方法或不同的检测程序测定的 收稿 日期：2008—05．2O