不同微种植体支抗材料对护骨素与护骨素配体基因表达的影响.pdfVIP

340 福建医科大学学报 2012年 1O月 第 46卷第 5期 不同微种植体支抗材料对护骨素与护骨素配体基因表达的影响 林有籁 ，林 毅 ，张 韬。 摘要 ： 目的 评价不同种植体支抗材料镍铬合金、钴铬合金、钛和聚乳酸酯对人成骨样细胞 MG-63的细胞 毒性及护骨素(Osteoprotegerln，OPG)与 OPG配体 即破骨细胞分化因子(Receptoractivatornuclearfactor-kappaB ligand，RANKL)mRNA 的表达量 的影响。 方法 选择人成骨样细胞系 MG-63作为细胞毒性的实验对象，分为 5组，即对照组，浓度为 0．05 的镍铬 、钴铬 、聚乳酸酯、钛微粒各一组 。用 MTT法检测细胞存活率 ；用半定量 RT— PCR检测在相同浓度 的各种材料的作用下，人成骨样细胞 内OPG／RANKLmRNA的表达变化 。 结果 浓度为 0．05 的不 同粒子对人成骨样细胞 MC--63的细胞毒性及 OPG／RANKLmRNA 的表达量 的影 响：(1)镍铬微粒对 细胞生长有一定的抑制作用 ，钛微粒则有较强的抑制作用 ；钴铬微粒和聚乳酸酯微粒对细胞 的增殖无 明显的副作 用 。(2)镍铬微粒对细胞 OPG的表达产生抑制作用 ，与对照组 比较 ，差别有统计学意义 ；钴铬微粒和聚乳酸酯微粒 对细胞 OPG的表达无 明显影响，与对照组 比较差别无统计学意义；钛粒子诱导 OPG在细胞 中的表达量大大增加 ， 与对照组 比较差别具有统计学意义 。(3)镍铬微粒可有效诱导人成骨样细胞 中 RANKL的表达 ，钴铬微粒对 RANKL的表达具有一定的诱导效果，两者与对照组 比较 ，镍铬微粒诱导效果更强，呈现显著性差异，钴铬微粒则 呈现一般性显著；而钛微粒则显著增加 RANKL的表达量 ；聚乳酸酯对人成骨样细胞 中RANKL的表达则无 明显 的诱导作用 ，与对照组 比较 ，差别无统计学意义 。 结论 聚乳酸酯材料 的细胞毒性最小，对 0PG／RANKLmR— NA 的表达量影响最小 ；钛次之 ；而镍铬 、钻铬合金对 0PG／RANKLmRNA的表达量有一定的影响。 关键词 ： 骨保护素 ；配体 ；钛 ；基因表达；膜糖蛋 白类 ；铬合金 中囤分类号 ： R392．11；R341．32；R329．24 文献标识码 ： A 文章编号 ： 1672—4194(2012)05—0340—04 微种植体支抗 的材料按生物学特性可分为生 的影响，以期为不 同微种植体支抗材料 的临床运用 物相容性材料 、生物惰性材料和生物活性材料 ，其 提供理论基础。 代表材料为镍铬合金 、钴铬合金、钛和聚乳酸酯uj。 1 材料与方法 各类微种植体支抗材料各有优缺 ，在临床上使用时 存在种植体脱落 、折断和需二次手术取 出等 问题 ， 1．1 主要试剂和仪器 镍铬 、钴铬合金微粒 (海宁 目前尚未得到解决[2]。微种植体支抗植入后脱落失 飞达冶金粉末有限公司)，打磨制得 (实验用粒子经 败是由于破骨细胞活动活跃 ，造成种植体周 围骨组 过 100目筛筛选所得)；聚乳酸酯 PLA(平均分子量 织 的吸收大于形成所造成的。研究表 明，破骨细胞 5000)(山东省医疗器械研究所)，其纳米微粒根据 分化因子 (receptoractivatornuclearfactor—kappaB 文献[4]方法制备，粒径 200nm；钛粉 [阿法埃莎 ligand，RANKL)、破骨细胞分化 因子的受体活化 因 (AlfaAesar)公司]，将其制备成细胞可吞噬的钛微 子 (receptor activator nuclear factor—kappa B， 粒 ，粒度分析仪测定所制备钛微粒中99．7 的粒径 RANK)和护骨素 (osteoprotegerin，OPG)在骨代谢 3Fm，粒径分布 曲线呈正态分布 ；人成骨样细胞 过程起着极其重要 的作用 ，三者共 同参与调节破骨 MG一63(中科院典型培养物保藏委员会细胞库)；细 细胞的分化和激活功能 J。 胞培养用 DMEM 培养基、小牛血清 (美 国Hyclone 本研究在体外将