毕赤酵母高密度发酵工艺的研究.pdfVIP

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中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2009,29(5):120~125 毕赤酵母高密度发酵工艺的研究 林俊涵 (福建生物工程职业技术学院 福州 350002) 摘要 高密度发酵是毕赤酵母提高蛋白表达量的一种重要策略,发酵工艺是高密度发酵的一个 重要因素。采用下列措施均可以有效地提高表达水平:调节基础培养基,采用变pH和变温发酵, 提高DO,选择最适的诱导前菌体密度和比生长速率并降低甘油初始浓度和采用分段式指数流加 进行调控。选择合适的甲醇补料策略:甲醇限制补料(MLFB)、氧气限制补料(OLFB)、甲醇不限 制补料(MNLFB)和温度限制补料(TLFB)。采用两种方式调控补料:诱导阶段菌体生长时,甲醇 -1 -1 比消耗速率(q )为0.02-0.03gg h ,而菌体不生长时,q 采用较高值。 MeOH MeOH 关键词 毕赤酵母 高密度发酵 发酵工艺 中图分类号 Q815   巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)是一种能高效表 同时补加PTM1微量盐溶液。许多外源蛋白通过BSM 达外源蛋白的表达系统,具有遗传稳定、表达水平高、 获得有效表达,但有些蛋白则效果不好,甚至不表达, 蛋白可翻译后加工、产物可分泌、可高密度发酵等许多 因此,在表达不同蛋白时,需对BSM进行优化。 [1] 1.1 碳源的优化 优点 ,应用十分广泛,已有数百种外源蛋白在该系统 中获得表达。   甘油是菌体生长阶段普遍采用的碳源,通过补料   高密度发酵是基因工程菌提高外源蛋白表达水平 加入培养基,其浓度过低或过高会限制或抑制菌体生 的一种重要策略,迄今,已有许多蛋白通过高密度发酵 长,因此,需要优化初始甘油浓度,选择有效的补料方 获得高表达量,如巴西三叶胶腈水解酶的表达量高达 式。葡萄糖也可作为碳源,虽效果不如甘油,但性价比 [2] [3] 却优于甘油,以葡萄糖代替甘油将有利于工业化生 22g/L ,植酸酶表达量达 12.2g/L ,SAM表达量达 [6] [4] [5] 产 。 11.63g/L ,1,31,4 D葡聚糖酶表达量达3g/L ? ?β??   甲醇是诱导表达阶段的碳源,其浓度(C )和补 等。但是,不同外源蛋白的表达水平相差很大,引起这 MeOH 料方式是关键。C 过低,会限制菌体生长和诱导强 种差异的重要因素有二:一是重组菌本身特性,如基因 MeOH 度;C 过高,则对菌体产生毒性。甲醇最佳浓度一般 本身特性、基因拷贝数、密码子使用频率等,二是发酵 MeOH [7] 工艺。目前,针对甲醇毕赤酵母高密度发酵,业界已建 在0.5%~3%(v/v),但有些蛋白高于3% ,因此,不 立起较为成熟的补料分批发酵和连续发酵两种方式, 同蛋白的最佳浓度不同,需通过实验并结合补料策略 确定。C 通过补料调节并保持

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