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文献综述 光甘草定提纯研究 1 前言 甘草为豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch)、胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Bat)或光果甘草(Glycyrrhiza glabra L)的干燥根及根茎，是一种常用的重要中药[1]。甘草中的活性成分主要包括3类：三萜类(以甘草甜素为主)、黄酮类和多糖类。甘草黄酮类成分(1icorice flavonoids)具有多种生理功能，如抗脂质过氧化、抑制多种肿瘤细胞的增殖、诱导凋亡等[2]。光甘草定( Glabridin ,图1)是光果甘草所特有的异黄酮类成分，它不仅在光果甘草黄酮类成分中含量最高(占11％)，而且具有良好的药用开发价值。作为光果甘草中的主要脂溶性异黄酮，光甘草定主要留存在提取甘草水溶性成分后留下的甘草废渣中。在药理实验中，光甘草定显示出明显的抗氧化、保护神经细胞作用及一定的降血脂和降血压等作用[3-4]，在心脑血管疾病的防治药物研究中亦显示出良好的前景。 图1　光甘草定的化学结构式 2 光甘草定的结构性质 光甘草定(glabridin)微黄色粉末，mp.233.3～235.5℃, [α]19＋9.5°(c0.3,CHCl3);与FeCl3反应显棕色。TLC:Rf = 0.42(展开剂CH2Cl29%/MeOH, Silica gel 60 F254)。UVλmax(EtOH)nm:230,282,322(sh)。EI-MS m/z(rel. int.,% ):324(M+,31) , 309(M+-CH3,100),187(14), 173(52),136(8);分子式C20H20O4 ,计算值: C 74.06;H 6.21; 测定值:C 74.24; H 6.27。IRλmax (KBr)cm-1:3374,1620,1607,1596,1519。1H NMR ( 400MHz,CDCl3)δ:7.68 (1H, br s,OH),7.48, (1H,brs,OH),6.91 (1H,d,J = 8.2 Hz, 6′-H) 6.81 (1H,d,J = 8.2 Hz,5-H),6.64 (1H,d,J = 9.9 Hz,4″-H) 6.46 (1H,d,J = 2.2 Hz, 3′-H),6.39 (1H, d,J = 8.2Hz, 2.2,5′-H),6.33(1H,d,J = 8.2 Hz,6-H) , 5.55 (1H,d,J = 9.9 Hz, 3″-H) , 4.39 (1H,dd,J = 1.8, 3.2,10.3 Hz, 2-H) ,4.01 (1H,ddd,J = 10.3,10.3 Hz,2-H) ,3.52 ( 1H,m,3-H) ,2.99(1H,dd,J = 11.0, 15.7Hz,4-H) ,2.83 (1H,m, 4-H) , 1.42, 1.40 (3H each,s,5″-and6″-CH3)[5]。 3 光甘草定的分离和提纯 3.1 光果甘草总提取物的制备[6] 取光果甘草50g，研碎，分别用丙酮提取3次，合并3次提取液，减压蒸馏回收丙酮，得黄褐色浸膏2g(总提取物)，提取分离工艺见图2。 3.2 柱层析法分离 3.2.1 Al2O3柱层析分离 将氧化铝置于玻璃层析柱内(2 cm×30 cm，上柱高度为15cm)甲醇浸泡24h。将总提取物与少量Al2O3混合，加入 Al2O3层析柱后，采用浓度梯度法(分别用CH2Cl2、CH2Cl2／MeOH 2.5%、CH2C12／MeOH 5%、CH2Cl2／MeOH 10%、CH2Cl2／MeOH 40%)进行洗脱。因Al2O3极性大而能吸附极性大的成分，而通过洗脱可得到极性小和极性中等的组分。因光甘草定的极性中等而留在极性中等的组分中(组分Ⅱ)。 3.2.2 硅胶柱层析分离 将组分Ⅱ用硅胶层析柱进行分离(2cm×20cm，上柱高度15cm)，分离成Ⅱ(A)、Ⅱ(B)和Ⅱ(C)3个组分；洗脱液浓度分别为：CH2Cl2、CH2Cl2／MeOH (100：2.5)、CH2Cl2／MeOH(20：1)、CH2Cl2／MeOH(10:1)、CH2Cl2／MeOH(5:2)。 3.3 制备型薄层板分离 将组分Ⅱ(C)用制备型薄层板进行进一步分离(CH2C12／MeOH 9%)，收集Rf值为0.42的色带，并用丙酮提取，减压蒸干。用苯／环己烷混合溶剂重结晶，得光甘草定纯品。分离过程中，光甘草定用简单的TLC法进行监测跟踪(硅胶GF254薄板，展开剂为9%甲醇／CH2Cl2)。用紫外灯观察并记录