人载脂蛋白A～Ⅰ的基因克隆﹑原核表达及多克隆抗体的制备.pdfVIP

· 804 · 西南军医2011年9月 第 13卷 第5期 JournalofMilitarySurgeoninSouthwestChina，Vo1．13，No．5，Sept．20l1 人载脂蛋 白A—I的基因克隆、原核表达及多克隆抗体 的制备 任凤莲 ，何长洋 [摘要] 目的 获取人载脂蛋白A—I(ApoA—I)的重组蛋白，并用于多克隆抗体的制备。方法 从人肝细胞 (LO2)中提取总RNA后，经RT～PCR法得到人ApoA～I基因片段，用以构建融合表达栽体 pGEX一6P一1一ApoA—I 的重组质粒：将该重组质粒转化至大肠埃希菌BI21中，用畀丙基硫代一p—D一半乳糖苛(IPTG)诱导表达GST～ApoA ～ I包涵体蛋 白，通过蛋 白复性和纯化后免疫小鼠得到多克隆抗体，并用ELS／A法检查其效价。结果 经PCR扩增出 的ApoA—I基因片段 (746bp)与理论值大小基本一致。SDS～PAGE(十二烷基磺酸钠 ～聚丙烯凝胶 电泳)以及west— elblotting(蛋白印迹分析)验证纯化后的蛋白质分子量与质谱分析数据相符。免疫小鼠所得的免疫血清通过ELISA 显示其抗体效价