利用HPLC法对香蕉根中四种内源激素测定方法的优化.pdfVIP

· 研究简报 · 北方 园艺2o12(o8)：30～33 利用 HPLC法对香蕉根中四种内源激素 测定方法的优化 步 佳 佳 ，胡 玉 林 ，魏 长 斌 ，谢 江 辉。，何 新 华 (1_广西大学 农学院，广西 南宁 530004；2．中国热带农业科学院 南亚热带作物研究所 ，广东 湛江 524091) 摘 要：研究了高效液相色谱法测定香蕉根 中4种 内源激素：赤霉素 (GAs)、3-吲哚 乙酸 (IAA)、脱落酸(ABA)和玉米素 (ZT)的最佳条件。采用AgilentZORBAXSB—Cl柱 (250IDEn× 4．6mm，5 m)进行分离测定。结果表明：G 、IAA、ABA测定的最佳条件是甲醇 ：乙腈 ：磷酸 缓冲液 (pH3．5)为15：2O：65为流动相，检测波长为 210nnl。ZT测定最佳条件为：甲醇 ：乙 腈 ：磷酸缓冲液(pH 3．5)为 15：15：70为流动相，波长265nm。4种激素的进样量为20“L，流 速为 1mL／min，柱温为35℃。选用外标法进行了定量测定。试验结果表明其回收率高，是一种 快速有效的测定方法。 关键词：高效液相色谱；内源激素；香蕉；根 中图分类号：Q946．885 文献标识码：B 文章编号：1001--0009(2012)O8一O03O一04 高效液相色谱法(HPLc)是一种精密准确的测定有 蕉研究室提供，取生长6～9片叶的“金手指”幼苗的根洗 机物的方法 ，植物激素的 HPI 测定 已在仁用杏花 净 ，迅速用液氮冷冻并放置于一80℃冰箱待测。 、 甜樱桃 、梨 3等果实，油菜、莴苣、鸭梨等 籽粒 试验仪器：美国PESeries200高效液相色谱仪，美 上有所应用，但在香蕉中只有很少使用酶联免疫法测定 国Series200紫外可变波长检测器，自动进样器，Agilent 的报道，用 HPLC法对香蕉根中内源激素的测定尚未见 ZORBAXSB-C18柱 (250Ii-ln3×4．61Tin2，5 m)，Agilent 报道；在对草本植物的内源激素的测定中由于色谱条件 ZORBAXSB％84-Pack保护柱 (12．5mmX4．6m ，5肚m)， 和样品提取方法的限制[5]，一些研究结果存在分离效果 SHB-I118循环水式多用真空泵 (郑州长城科工贸有限公 不理想、峰形不良、拖尾等问题。在已有报道的基础上 ， 司)，旋转蒸发器 RE一52AA(上海亚荣生化仪器厂)， 该研究对样品的前处理方法进行了改进，使从植物组织 Universal32RHettich台式离心机，Agilent固相萃取仪， 中提取的内源激素，保持其 “天然”状态，同时，对色谱条 AgelaD()SC1。固相萃取小柱，DS一5510超声仪，UV1700 件进行比较和优化，摸索出一种操作简单、较快速、准 紫外分光光度计，Millipore纯水仪，JA3oO3电子分析天 确、重现性好的方法，为同时测定香蕉根中3一吲哚乙酸、 平，真空抽滤系统，0．22 m有机微孔滤膜。 赤霉素、脱落酸、细胞分裂素几种不同的植物内源激素 标准样品：赤霉素 (GAs)、3-吲哚乙酸(I从 )、脱落 的含量提供了良好的HPLC法。 酸 (ABA)、玉米素 (ZT)，纯度≥99．O ，均购 自Sigma 1 材料与方法 公司。 1．1 试验材料 化学试剂：甲醇 (色谱纯)、乙腈 (色谱纯)、乙醇 (分 供试香蕉品种 “金手指”，由南亚热带作物研究所香 析纯)、冰醋酸(分析纯)、十二水合磷酸氢二钠(分析纯)、 一 水合柠檬酸(分析纯)