DP-305423转基因大豆PCR检测方法研究.pdfVIP

吉林农业大学学报 2011，33(5)：518～521，526 http：／／xuebao． M．edu．cn JournalofJilinAgriculturalUniversity E-mail：flndxb@vip．sina．corn DP一305423转基因大豆 PCR检测方法研究 吕智超 ，李飞武2，周 宁一，闫 伟2，王丕武 ，张 明2 1．吉林农业大学生命科学学院，长春 130118；2．吉林省农业科学院，长春 130033 摘 要 ：根据 DP一305423外源插入片段与植物基 因组序列设计特异性引物 ，以lectin基 因(118bp)作为 内参 照基 因，筛选最佳引物并对反应程序和反应体系进行优化，最终建立转基 因大豆 DP一305423转化体特异性定 性PCR检测方法。对该方法进行 了特异性、灵敏度、稳定性和重复性测试。结果表 明：该方法能够特异性检 测 出DP一305423大豆 ；DP一305423转基 因大豆及其受体按质量 比进行混合 ，检测其灵敏度达到0．05％。约为 20个起始模板拷 贝；以DP一305423大豆 DNA质量分数为 1．0o％、0．10％、0．05％的样 品为模板 ，其稳定性好、 重复性高，假 阴性率为0。本试验设计的方法适用于DP一305423转基 因大豆特异性定性 PCR检测。 关键词 ：DP一305423转基 因大豆 ；定性PCR；检测方法 中图分类号：Q503；$565．1 文献标识码 ：A 文章编号：1000—5684(2O11)05—0518．04 DOl：CNKI：22—11o0／S0947．001 网络出版地址 ：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／22．1100．S0947．001．html 引文格式：吕智超 ，李飞武，周宁，等 ．DP一305423转基因大豆 PCR检测方法研究[J]．吉林农业大学学报， 201l。33(5)：5l8—521，526． EstablishmentofanEvent-SpecificQualitativePCRMethodforDetect- ingDP--305423TransgenicSoybean L()Zhi—chao’，一，LIFei—WU，ZHOUNing’，一，YANWei，WANGPi—WU’，ZHANGMing 1．CollegeofLifeScience，JilinAgriculturalUniversity，Changchun130118，China；2．JilinAcademyof AgriculturalSciences，Changchun 130033，China Abstract：AccordingtoDP一305423exogenousinsertsequencesconnectionwiththeplantgenomese- quences，thelectingenewaschosenasthereferencegene，thebestspecificprimerswere designed，the responseproceduresandresponsesystem were optimized，andfinallyan event-specificqualitativePCR methodfordetectingDP一305423transgenicsoybena wasestablished．Specificity，sensitivity，stba ility andrepeatba ilityofthismethodweretested．Theresultsshowedthatthemethodcan specificallydetect soybeanDP一305423；DP一305423soybena anditsreceptorweremixedbyweightratio，detectionsensi— tivityofthemethodwasupto0．05％ ，thenumberofDNA baout20copies；Wit