Chk1／2反义寡核苷酸对顺铂诱导的A549细胞生物学行为的影响.pdfVIP

第 37卷第 6期第 733页 华 中科技大学学报 (医学版) Vol_37 No．6 P．733 2008年 12月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Dec． 2008 Chkl／2反义寡核苷酸对顺铂诱导的 A549细胞生物学行为的影响* 叶 飞 高庆蕾。△ 黄晓园 谢大兴。 卢运萍。 周剑锋。 华 中科技大学 同济 医学 院附属 同济 医院 神经外科 妇产科 。普通外科 ，武汉 430030 摘要 目的 观察顺铂作用下 A549细胞 的细胞周期变化规律和 Chkl、Chk2(Chk1／2)反义寡核苷酸(As0DN)对顺铂 (DDP)诱导的A549细胞生物学行为的影响。方法 流式细胞术 SubG 法检测 DDP作用下A549细胞周期和凋亡的动力 学变化 ；蛋 白免疫印迹法(Westernblot)检测转染 Chkl／2AsODN后Chkl／2蛋 白的表达 ；流式细胞仪 AnnexinV—FITC法和 SubG 法检测转染 Chkl／2AsODN后 DDP作用下的细胞周期和凋亡变化 。结果 10／,mol／LDDP作用 12h后 A549细胞 出现 明显的S期阻滞 ，Chkl／2AsODN对 A549细胞 中Chkl／2蛋白表达有 明显抑制作用 ，转染 Chkl／2AsODN可显著增 加 DDP诱导下 A549细胞的凋亡率约 200 ～300 ，而联合转染 Chkl／2AsODN与单转染相 比，凋亡无 明显增加 (P 0．05)。转染 Chkl／2AsODN引起化疗增敏 的机制是通过解除 S期 阻滞这种肿瘤细胞 的 自我保护机制实现 的。结论 Chkl／2可作为肺癌化疗药物增敏治疗 的有效靶点，灭活 Chkl／2基因可以显著增强肿瘤细胞化疗 的敏感性 。 关键词 Chkl／2基因； 顺铂 ； S期阻滞 ； 细胞凋亡 中图法分类号 R734．2 DOI：10．3870／j．issn．1672—0741．2008．06．008 EffectsofAntisenseoligonucleotideTargetingChkl／2onApoptosis ofA549CellsInducedbyDDP YeFei，GaoQinglei ，HuangXiaoyuan etal DepartmentofNeurosurgery，DepartmentofObstetricsandGynecology，TongjiHospital，Tongji MedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030 Abstract Ohiective Toinvestigatethechangeofcel1cycleinducedbycisplatin (DDP)andtheeffectsofantisenseoligo— nucleotide(AsODN)targetingChkl／2onapoptosisinducedbyDDPinA549cells．Methods TheChkl／2proteinexpression wasdetectedbyWesternblotaftertransfectionofAsODN targetingChkl／2bylipofectamineintoA549cells．Apoptosisof A549cellsinducedbvDDPwasassayedbyflowcytometryaftertransfectionofChkl／2AsODN．Results AsvnchronizedA549 cellsweretreatedwithdifferentdosesofDDPtoactivateScheckpoints．TransfectionwithChkl／2AsODN couldinhibitthe expressionofChkl／2atdifferent1evels．E