猪Sertoli细胞在异种移植模型中对人免疫细胞功能的影响.pdfVIP

第 37卷第 6期第 712页 华中科技大学学报 (医学版) V0l_37 No．6 P．712 2008年 l2月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Dec． 2008 猪 Sertoli细胞在异种移植模型中 对人免疫细胞功能的影响* 谢 林 尹注增 胡 枫 王 璐 朱 珉 向 莹 陈 刚 陈 实 华 中科技大学 同济医学院附属同济医院器官移植研究所 ，教育部器官移植重点实验室， 卫生部器官移植重点实验室 ，武汉 430030 摘要 目的 通过体外实验 ，研究猪睾丸支持细胞 Sertoli细胞对猪一人异种移植模型中人外周血单个核细胞 (PB— MCs)功能的影响，以探讨 Sertoli细胞在诱导异种移植免疫耐受 中的潜在作用 。方法 采用改 良酶消化法获取新生猪睾 丸 Sertoli细胞 ，纯化后培养，检测分离的原代猪 Sertoli细胞纯度 ，并在光学显微镜和 电子显微镜下对猪 Sertoli细胞进行 形态学测定 。采集新鲜人血液 ，分离外周血单个核细胞 (PBMCs)，将原代猪 Sertoli细胞与人 PBMCs共 同孵育，观察 Sertoli细胞对人PBMCs凋亡率的影响，并与人PBMCs自身凋亡率进行 比较。在体外，用。H—TdR摄人法检测人 PB— MCs的增殖 ，对照组用刀豆蛋 白A(ConA)刺激活化人 PBMCs，实验组则将猪原代 Sertoli细胞与 ConA活化 的人 PB— MCs共 同培养 ，连续 4d检测人 PBMCs的增殖变化 。结果 采用该实验改 良法分离的新生猪 Sertoli细胞 ，经检测纯度 超过 93 。光学显微镜及 电子显微镜下均可见 Sertoli细胞胞体多突起、胞核 内多核仁、胞质 内多脂滴等典型特征 。经 Annexin—V／PI染色，流式细胞仪检测 ，猪 Sertoli细胞可诱导人 PBMCs凋亡率升高(8．92±1．75) 。高于人 PBMCs的 自身凋亡率 (3．09±0．75) (PO．01)。并且猪 Sertoli细胞能够延迟 ConA刺激 的人 PBMCs体外增殖峰的出现 (对照 组增殖峰在第 2天出现 ，实验组增殖峰在第 3天出现)，但是两组增殖峰峰值 间的差异没有统计学意义 。结论 采用该 法可以获得高纯度的猪 Sertoli细胞 。在猪一人异种移植体外实验 中，新生猪 Sertoli细胞能够诱导人 PBMCs凋亡 ，并且 能够延迟 ConA活化的人 PBMCs增殖反应 ，对人 PBMCs的活化增殖有一定程度 的抑制作用 。 关键词 异种移植 ； 猪睾丸支持细胞 ； 人外周血单个核细胞 ； 细胞凋亡 ； 细胞增殖 中图法分类号 R617 D0I：10．3870／j．issn．1672-0741．2008．06．003 EffectsofPorcineSertoliCellson HumanLymphocyteProliferationand ApoptosisinvitroinA XenOtransplantatiOnM odel XieIin，YinZhuzeng，HuFengetal InstituteofOrganTrn Zn” f0 ，KeyLaboratory0l，Organ丁r s声ZⅡ￡Ⅱo ，MinistryofEducation， KeyLaboratoryofOrganTrn”s声Z口 。0”，Ministry0_，PublicHealth，TongJ Hospital，Tongji MedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030 Abstract Objective ToinvestigatewhetherxenogeneicneonatalporcineSertolicellscould