胆管癌染色体DNA拷贝数的变化研究.pdfVIP

· 616 · 安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui 2008Dec；43(6) 胆管癌染色体 DNA拷贝数的变化研究 刘付宝 ，李江涛 ，薛建锋 ，刘颖斌 ，彭佳萍 ，徐伟珍 ，胡 亮。，关新元 ，彭淑牖 摘要 目的 探讨胆管癌全基因组 DNA拷贝数 的变化特 1．2 方法 征，寻找与胆管癌相关的癌基因和抑癌基因的染色体候选区 1．2．1 中期染色体的制备 抽取正常健康男性志 域。方法 采用比较基因组杂交方法分析 18例胆管癌组织 愿者外周血，外周血淋巴细胞培养，常规制备中期染 基因组的不平衡 ，即DNA拷贝数的扩增和丢失。结果 胆 色体玻片。 管癌常见的染色体DNA扩增区域是8q、20q、5p、17q；染色体 1．2．2 DNA抽提 基因组 DNA的提取采用传统 DNA缺失区域为3p、18q、17p、8p、9p。结论 胆管癌中存在 的酚／氯仿方法 J，正常对照 DNA来 自健康人外周 多条染色体拷贝数的改变，3p、5p、8p、8q、9p、17p、17q、18q、 血淋巴细胞。 20q等部位可能分别存在与胆管癌密切相关的癌基 因和抑 1．2．3 DNA探针的制备 切 口平移法标记 DNA 癌基因。 探针：肿瘤组织DNA和正常对照组织DNA分别用 主题词 胆管肿瘤／遗传学；核酸杂交；癌基因；基因；肿瘤抑 Spectrum—Green—dUTP(Vysis)和 Spectrum-Red—dUTP 制 中图分类号 R735．8；R342；R394．2 (Vysis)标记，15~C反应2h，凝胶 电泳检查酶切片 文献标识码 A 文章编号 1000—1492(2008)06—0616—05 段的长度，峰值500～1000bp的DNA片断最适宜， 可产生均匀一致，强烈的杂交信号，标记好的探针乙 胆管癌是一种胆道常见且高度恶性的肿瘤，来 醇沉淀纯化。 源于肝 内或肝外胆管上皮。胆管癌和其它恶性肿瘤 1．2．4 比较基因组杂交 ① 杂交混合液的准备： 一 样具有复杂的细胞和分子遗传学变化，但胆管癌 200ng的肿瘤基因组 DNA探针和 100ng的正常对 的遗传学研究资料并不多见。我们采用比较基因组 照组DNA探针和 10 l的Cot一1DNA混合，以阻断 杂交 (comparativegenomichybridization，CGH)…研 基因组内重复序列，混合后的探针用醋酸钠、冰乙醇 究 18例胆管癌的全基因组 DNA拷贝数变化，寻找 沉淀，然后将DNA溶于 l0 l杂交缓冲液中(50％ 可能与胆管癌发生有关的染色体基因位点，为克隆 甲酰胺 ，100mg／L硫酸葡聚糖，2×SSC，pH7．0) 胆管癌发生发展相关基因提供依据。 750(2变性5min，37~C孵育30min。② 染色体玻片 处理：制备好的中期分裂像玻片用 RNase处理和 胃 1 材料与方法 蛋白酶消化，1×PBS和 1×PBS／MgC12洗片，75％、 1．1 研究对象 18例胆管癌的新鲜标本均来 自浙 85％、100％乙醇脱水，70％甲酰胺变性液 75℃变性 江大学附属第二医院和浙江大学附属邵逸夫医院 5min，75％、85％、100％乙醇再脱水各 1min，自然 干