蒸汽预复水在冻干红细胞复水中的影响及机制.pdfVIP

· 660 · 安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2008Dec；43(6) 蒸汽预复水在冻干红细胞复水中的影响及机制 杨媛媛 ，舒志全 ，刘 忠。，姚余有 摘要 目的 了解蒸汽预复水对冻干红细胞的保护机制，分 1 材料与方法 析由于渗透压变化造成细胞体积变化而溶血的损伤机制， 优化复水程序、降低溶血率。方法 将冻干后的红细胞置于 1．1 材料 37~C培养箱中预复水3h后进行复水，并以未进行预复水的 1．1．1 试剂 海藻糖 (南宁中诺生物工程有限责 红细胞作为对照，对两组红细胞的形态学、溶血率、ATP含 任公司，高纯度)，聚乙烯吡咯烷酮 (PVP，Acros公 量 、2，3-DPG含量及回收率进行评价。结果 红细胞溶血率 司，分子量29～32ku)，牛血清 白蛋白(Slabio)，肝 实验组为 22．2％ ±2．1％，对照组为 35．4％ ±2．4％ (P 0．05)；红细胞2，3-DPG含量实验组为 (7．014-1．17)tzmol／ 素钠注射液 (上海第一生化药业有限公司，2ml： gHb，对照组为 (6．82±2．1O)i~mol／gHb(P0．05)；红细胞 25000u)。二水合乙二胺 四乙酸二钠 (EDTANa． ATP含量实验组为(5．13±0．52)Ixmol／gHb，对照组为 (5．22 2HO，分析纯)、盐酸(分析纯)、氢氧化钠 (分析 ±0．10)I~mol／gHb(P0．05)；与对照组比较 ，实验组的压积 纯)购 自北京化工厂。氰化高铁血红蛋 白试剂盒 回收率和细胞平均体积明显增高(P0．05)，体积分布宽度 (南京建成生物公司)，2，3-DPG酶连免疫检测试剂 明显下降(P0．05)。结论 蒸汽预复水能够保护红细胞 盒(美国RD公司)，ATP生物发光法试剂盒 (上海 膜的完整性 ，大大提高冻干红细胞的回收率。 科端生物科技有限公司)。 主题词 红细胞；冷冻干燥法 1．1．2 仪器 冻干机 (AdvantageEL，Virtis，USA)， 自由词 蒸汽预复水 冰点渗透压计 (Osmomat030CryoscopicOsmometer， 中图分类号 R318．08；R331．122 Germany，误差 ±0．005Osmol／kg)，离心机 (Hettich 文献标识码 A 文章编号 1000—1492(2008)06—0660—05 ZENTRIFUGEN，MIKRO22)，紫外可见分光光度计 目前文献中，复水方式基本上都是直接将复水 (BeckmanCoulter，DU640，USA)，酶联免疫检测仪 溶液加到冻干样品中，即采用直接快速的复水方式， (南京华东电子，DG5031)，荧光分光光度计 (北京 但复水后的细胞回收率普遍不是很高 ¨j。Croweet 第二光学仪器厂)，血细胞分析仪 (MICROS60．OT， al_2-41曾在冻干血小板中尝试过在将复水液加到冻 ABX，France)，生物显微镜(Nikon，YS2)。 干样品之前，将干燥样品放到一个 内部装有水的密 1．2 方法 闭盒子中，持续2～3h，使样品吸收一些水蒸气。这 1．2．1 海藻糖负载红细胞 从合肥红十字会中心 一 过程称之为 “预复水 (pre．rehydration)”。但这一 血站获取健康人红细胞，将其重悬于生理盐水中，以 方法仅被简单提到过，没有进行较深人的研究。笔