玉米大斑病菌黑色素合成酶基因4HNR的克隆及其启动子预测.pdfVIP

植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 38(6)：64l (2008) 玉米大斑病菌黑色素合成酶基因4HNR的 克隆及其启动子预测 温雷蕾，曹志艳，董金皋 (河北农业大学植物保护学院植物分子病理学实验室，保定071001) Cloningandpromoterpredictionofmelaninbiosynthesisgene4HNR inSetosphae— rlaturcica WEN Lei-lei，CAO Zhi—yah，DONG Jin—gao (MolecularPlantPathologyLab．，CollegeofPlant Protection，AgriculturalUniversityofHebei，Baoding071001，China) Abstract：4HNR (1，3，6，8一tetra—HN reductase)geneofmelaninbiosynthesisinSetosphaeriaturcicahad beencloned successfullybyRT—PCR inhtisstudy．BothsequencesofDNA andcDNA of4HNRwere807bp andhterewasnointroninhtesequences．ThisgeneonlyhadsinglecopyingenomethroughSouthernblotting na alysis．A 2285bpforhteflnakingsequenceof5 hadbeenobtainednadithadpromoterstructurethrough thesoftwarena alysis． Keywords：Setosphaeriaturcica；melnain；4HNR；promoter 文章编号：0412-0914(2008)06-0641-04 玉米大斑病菌(Setosphaeriaturcica)是玉米上 基因的表达水平影响很大，是基因工程表达载体的 的一种重要丝状病原真菌，主要通过产生附着胞利 重要元件。因此，研究启动子的克隆方法对研究基 用机械压力穿透寄主组织侵入寄主 J，而机械压 因表达调控和构建表达载体至关重要。 力则来 自附着胞产生的黑色素和甘油颗粒 J。可 1 材料与方法 以看出，黑色素的产生对病菌附着胞的发育有重要 1．1 菌株 的作用，进而影响病菌的致病性。 前期研究发现，玉米大斑病菌黑色素为DHN 玉米大斑病菌01-23(河北农业大学植物分子 黑色素 J，其合成途径中任何一个功能基因缺失， 病理学实验室保存)，大肠杆菌DH5a(购于上海生 都会使该基因前的底物积累，致使黑色素不能形 工生物工程技术服务有限公司)。 成 。在玉米小斑病菌中，4HNR基因编码 1，3，6，8一 1．2 玉米大斑病菌总RNA和基因组 DNA的提取 四羟基萘还原酶，催化 1，3，6，8一THN到 scytalone 按照UNIQ一10柱式 Trizol总RNA抽提试剂 的生物合成_4J。明确玉米大斑病菌中该基因的功 盒说明及安鑫龙等改进的CTAB法 提取玉米大 能及调控机制，在基因水平上研究黑色素对附着胞 斑病菌总RNA和DNA。 机械穿透力的调节作用，可以为研究病原物与寄主 1．3 RT-PCR反应 分子互作、真菌致病机理和探讨植物病害防治的新 方法、新途径提供理论依据。研究表明，启动子对 1．3．1 反转录体系及第一链 cDNA的合成 按照 收稿 日期：2008-03-25；修回日期：2008-08-28 基金项 目：国家 自然科学基金项 目(3