猪C3d分子佐剂PRRSV GP5基因核酸疫苗的构建及免疫效果的研究.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(12)：2582—2588 ScientiaAgriculturaSinica doi：10．3864~．issn．0578—1752．2011．12．022 猪 C3d分子佐剂 PRRSVGP5基因核酸疫苗的构建 及免疫效果的研究 夏庆祥 ，张德庆 ～，吴家强 ，牛 星 ，王小龙 ，牛钟相 (山东农业大学动物医学院，山东泰安 271018： 山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室，山东泰安 271018； 泰安中心医院检验科 山东泰安 271000； 山东农业科学院畜牧兽医研究所，济南 250100； 山东畜牧兽医职业学院，山东潍坊 261061) 摘要：【目的】构建猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)GP5基因C3d—P28分子佐剂重组质粒，探明c3d-P28分 子佐剂的免疫增强效果。【方法】用大肠杆菌疫苗对健康猪进行免疫激活，提取猪肝脏总RNA，RT-PCR克隆C3d-P28 并连接至pUC19载体，构建pUC19-P28．n(2、4、6)串联体，然后分别将P28．n(2、4、6)连接至真核表达载体 pcDNA3．1构建成 pcDNA3．卜P28．n(2、4、6)。RT—PCR扩增PRRSVGP5基因，分别定向克隆至pcDNA3．1-P28．n(2、 4、6)中，构建 pcDNA3．卜GP5一P28．n(2、4、6)重组质粒；提取重组质粒进行双酶切、电泳，同时用重组质粒 转染Marc145细胞，经间接免疫荧光进行蛋白表达检测，并用重组质粒免疫小 鼠，通过 ELISA试剂盒检测小 鼠体 内抗体 、IL一4和 IFN—v的水平，检验重组质粒的免疫效果。 【结果 】从猪肝脏 中克隆了C3deDNA，构建 了 pcDNA3．1-P28．n(2、4、6)串联体，并将PRRSVGP5基因定向克隆至真核表达载体 pcDNA3．1-P28．rl(2、4、6) 中，构建了PRRSVGP5重组质粒 (pcDNA3．卜GP5一P28．2、pcDNA3．卜GP5一P28．4、pcDNA3．卜GP5一P28．6)；通过检测 小鼠血清中抗体 、IL-4和 IFN-y的结果显示，抗体效价、IL-4和 IFN-Y含量均 比对照组高，且 以 pcDNh3．卜GP5一P28．6组的效果最好，与空白对照及 PCDNA3．卜GP5组比较差异均显著 (P0．05) 【结论】构建 了 猪11、体 C3d-P28分子佐剂 PRRSVGP5重组质粒，该质粒可刺激机体产生较高的体液免疫和细胞免疫水平，il、体 C3d-P28分子佐剂能显著增强PRRSVGP5基 因的免疫效果。 关键词：PRRSV；C3d—p28佐剂；GP5基因疫苗；免疫效果 ConstructionandImmunogenicityofDNAVaccinesContainingGP5 GeneAgainstPRRSVwithPorcineC3dasMolecularAdjuvant XIAQing—xiang，，ZHANGDe—qing，WUJiaqiang4，NIUXing，WANGXiao—long，， NIU Zhong—xiang (CollegeofVeterinaryMedicine,ShandongAgriculturalUniversity,Taian271018,Shandong；ShandongProvincialKey LaboratoryofAnimalBiotechnologyandDiseaseControlandPrevention，Taian271018,Shandong；DepartmentofLaboratory TaianCentralHospital,Taian271000,Shandong；4InstituteofVeterinaryMedicine,ShandongAcademyofAgriculturalSciences Jinan250100；’ShandongVocationalAnimalScienceandVeterinaryCollege,耽 ng261