CALA在毕赤酵母中的表达、纯化及酶学特性研究.pdfVIP

生物技术通报 · 研 究报 告 · BloTECHNoLoGY BULLETlN 2011年第 6觏 CALA在毕赤酵母 中的表达、纯化及酶学特性研究 严慧玲 蓝东明 王永华 杨博 (华南理工大学轻工与食品学院，广州 510640；华南理T大学生物科学与工程学院，广州 51o460) 摘 要： 将南极假丝酵母脂肪酶A(cala)基 因克隆至组成型表达载体pGAPZc~A中，电激转入X-33，获得高效表达的 CALA酵母工程菌株。发酵液上清经超滤浓缩、硫酸铵沉淀和 阴离子 交换层析等步骤，获得纯化的重组CALA，其比酶活达 384．90U／mg。该酶最适温度为70~C，最适pH值为80。经50~C保温2h，仍含有60％水解酶活力；在pH7．0和8．O溶液中比 较稳定。经DMSO处理 lh，仍保持 9o％的活性；非离子型表面活性剂能提高CALA的酶活，金属离子在不同程度上抑制 CA— LA的酶活。 关键词： 南极假丝酵母脂肪酶A 毕赤酵母 组成型表达 纯化 酶学性质 Expression，PurificationandPropertiesofCandidaantarctica LipaseA inPichiapastoris YanHuffing LanDongming WangYonghHa YangBo (CollegeofLightIndustryandFoodScience，SouthChinaUniversity Technology，Gnangzhou510640； ColelgeofBioscienzeBioengineering，SouthChina UniversityofTechnology，Guangzhou510640) Abstract： LipaseAgenefromCandidaantarctica(CAIA)wasclonedintopGAPZc~AvectortogeneratepGAPZctA—CALA，and thentheconstructwasusedtotransform PichiapastorisX一33cells．Crudeenzymewaspurifiedwith10kD membrane，50％ ammonium sulphateprecipitationandAnion—exchangechromatography．Afterpurification，thespecificactivityreached384．90U／mg．Theoptimal temperatureandpH forCALAwere70~CandpH8．0．respectively．Itremained60％ ofactivityafterincubationat50℃ ofr1handthe lipasewasrelativelystableatpH range7．0—8．0afterincubatedindifferentpH solution atroom temperature．Thelipaseremained 90％ activityafterincubatedinbuffercontaining30％ dimethylsulfoxidefor1h．Thepresenceofnon—ionicsui teactiveagenten— haneedtheactivityoftheenzyme，whilemetal ionsdecreasedlipaseactivity． Keywords： CandidaantarcticaLipaseA(CALA) PichiaPastoris GAPpromoter Purification Propertiesofenzyme 脂肪酶 (Lipase，EC3．1．1．3)是一类在食品及医 了与南极假丝酵母脂肪酶 B(Candidaantarcticali． 药等行业应用广泛的酶类…。南极假丝酵母脂肪 paseB) 同样的高温稳定性和有机溶剂耐受性，而 酶 A(CandidaantarcticalipaseA，CALA) ，是现有 且 比C