人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性检测.pdfVIP

第 30卷第 5期 大 连 工 业 大 学 学 报 Vo1．30 NO．5 2011年 9月 JournalofDalianPolytechnicUniversity Sept．2 0 11 文章编号 ：l6741404(2011)050346—04 人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性检测 夏 清 风 ， 侯 英 敏 ， 曹 芳 ， 金 朝 霞 (大连工业大学 生物工程学院，辽宁 大连 116034) 摘要 ：将PCR扩增的人溶菌酶编码基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中，双酶切和测序鉴定 表明，重组载体构建正确 。电转化毕赤酵母 GS115菌株 ，通过 G418筛选获得高拷贝重组菌株后 ，用 甲醇 诱导表达 ；通过 SDS检测证 明上清中有 目的蛋 白，表达产物与预期大小的人溶菌酶蛋 白分子质量 15ku一致 ，其表达量 占分泌总蛋 白的32 。体外抑菌实验证实重组人溶菌酶蛋 白对溶壁微球菌、金黄色 葡萄球菌 、大肠杆菌和枯草杆菌均有明显的抑菌作用 ，表明在毕赤酵母 中成功表达 了重组人溶菌酶。 关键词 ：人溶菌酶；毕赤酵母；pPIC9K；表达 中图分类号：TQ127．2 文献标志码 ：A Expressionofthehuman lysozymeinPichiapastoris andantibacteriaIactivitiestest XlA Qing—feng， HOU Ying-m in， CAO Fang， JIN Zhao-xia (SchoolofBiOengineering，DalianPolytechnicUniversity，Dalian116034，China) Abstract：The HLY coding gene was cloned into P． pastoris expression vector pPIC9K． The pPIC9K／HIY wasverified by two enzyme digestion and sequencing and then transferred into P．pastorisGSl15 strain by eIectroDoration．Therecombinantstrainswere isolatedbv G418．The resultsofSDS—PAGE demonstrated thatthe fermentation supernatant contained therecombinant proteinupto32 oftotalproteinsanditsmolecularweightis15ku．Invitrotherecombinantprotein hascertainantim icrobialactivityagainstM ．1ysodeikticus，E．coli，S．aureasandB．subtilis，which show thatthesuccessfulexpressionoftherecombinantHLY inP．pastorisandthusprovidethebasis foritslarge—scaleproduction usingP．pastorissystem． Keywords：humanlysozyme；Pichiapastoris；pPIC9K ；expression 0 引 言 困难 ，远远不能满足市场的需要 ，所 以开发重组人 溶菌酶具有十分光 明的市场前景。 人溶菌酶 (HumanIysozyme，HIY)又称胞 毕赤酵母 (P．pastoris)是一种高效的真核表达 壁质酶 ，能水解细菌细胞壁 中