iTRAQ联合液相层析串联质谱技术在常见恶性肿瘤蛋白质组学研究中的应用进展.pdfVIP

· 714 · 肿瘤防治研究2011年第38卷第6期 DOI：10．3971／j．issn．1000—8578．2011．06．030 · 综述 · iTRAQ联合液相层析串联质谱技术在常见 恶性肿瘤蛋 白质组学研究中的应用进展 甘嘉亮综述，高 枫审校 关键词：蛋 白质组学；同位素标记相对和绝对定量；液相层析 串联质谱；应用进展 中图分类号：Q5o3；R730．43 文献标识码 ：A 文章编号：1000—8578(2011)06～0714—03 0 引言 快速、标记准确、标记效率高等优点。iTRAQ标记 蛋 白质组学(proteomics)是后基因组时代出现 后，需要液相色谱层析去除影响后续质谱分析的还 的新兴研究领域之一，其研究 目标是对生物体的所 原剂、有机溶剂、缓冲溶液和过量的 iTRAQ试剂 有蛋白质进行定位、鉴定和结构功能分析，探索蛋 白 等 。目前，与液相色谱兼容的常用 串联质谱包括 质之间的相互作用 。蛋 白质组学研究主要依赖三大 MALDI—TOF／TOF和 QSTARXLrMS／MS。所 技术：蛋 白质分离技术、蛋白质鉴定技术和生物信息 以，使用 iTRAQ联合液相层析串联质谱技术的基 学 。蛋 白质组学研究的实验技术从最初经典的双 本流程是蛋 白质样 品制备一iTRAQ标记样 品一液相 向凝胶电泳(2一DE)发展到相对定量技术_]]，包括荧 色谱纯化样品一串联质谱分析。 光差 异凝 胶 电泳 (differencegeleletrophoresis， DIGE)、同位 素亲和标记 (Isotopecodedaffinity 2 iTRAQ标记联合液相层析串联质谱技术在常见 tag，ICAT)和同位素标记相对和绝对定量 (isobaric 恶性肿瘤蛋白质组学研究中的应用 tags for relative and absolute quantitation， 2．1 原发性肝癌 iTRAQ)，其 中DIGE、ICAT 由于其本身技术的缺 原发性肝癌的蛋白质组学研究与其他恶性肿瘤 陷，现在逐渐被 iTRAQ取代，真正实现简便、快捷、 相比起步较早，随着 iTRAQ标记技术产生，其在原 高通量检测 。本文就 iTRAQ联合液相层析串联质 发性肝癌蛋白质组学的各个方面研究也得到了一定 谱在常见恶性肿瘤蛋 白质组学研究中的应用情况作 的应用。Chaerkady等 应用 iTRAQ标记技术联 一 综述。 合 LC_MS／MS比较肝细胞性肝癌与临近正常组 织 ，鉴定出600多个蛋白质 ，发现多个与肝癌相关的 1 iTRAQ联合液相层析 串联质谱技术简介 新蛋 白，包括类纤维蛋 白原蛋 白2(fibroleukin)、诱 2004年，美国应用生物系统公司(AppliedBio— 导产生 56kDa蛋 白的干扰素(interferoninduced56 systemslnc，ABI)推 出一种 多肽体外标记试剂 kDaprotein)、乳脂球一表皮生长 因子 8(milkfat iTRAQTM (isobarictagsforrelativeandabsolute globule—EGFfactor8)，骨髓相关分化标志物 (mye— quantitation，iTRAQTM)，它 由相对分子质量均为 loidassociateddifferentiationmarker)等，首次应 145的4种等量异位标签分子组成，包括相对分子 用蛋 白质组学的研究方法揭示尿素代谢循环 中五个 质量 114、115、116、117Da的报道基 团，相对分子质 关键酶戏剧地下调的表现；在有差异的蛋白质中，三 量为31、30、29、28Da的质量平衡臂和一个相