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维普资讯 第23卷 第2期 青 海 大 学 学 报 (自然 科 学 版 ) V01．23N0．2 2005年4月 JoumalofQinghaiUniversity(NatureScience) Apr．2005 RNA干涉方法在拟南芥钙调 蛋 白类基因研究中的应用 段瑞君 (青海大学生物科学系，青海西宁 810016) 摘要：以拟南芥芯片杂交分析 中发现的一个低磷条件下诱导的钙调蛋白类基 因AtPsiCaM为研 究对象，通过RNA干涉使该基因沉默，获得AtPsiCaM基因的转基因干涉植株，以期对该基因进 行进一步的功能研究。 关键词：拟南芥；钙调蛋白类基因；RNA干涉 中图分类号：Q813 文献标识if~：A 文章编号：1006—8996(2005)02—0034一o3 RNA interferencetechniqueappfiedinArabidopsis Pi—starvationinducedCaM genestudy DUANRui—-Jun (DepartmentofBiologySciences，QinghaiUniversiyt，yani~810016，Chilla) Abstract：Acalmodulingene—AtPsiCaM (ArabidopsisPi—starvation ducedCaM)inducedbyph0s— phatestavationwhichwasfoundingenechipanalysisWas sutdied．Themechanism ofanewphenomenon— geneticinterference directedbydouble—strandedRNAWas firstappliedniAtPsiCaM genestudyandleads topost—transcriptionalgenesilencing．Obt~ SAtPsiC_aM transgenicplantswillbepropitioustostudyon thisgenefunction． Keywords：Arabd／opss／；calmodulin—likegene(CaM)；RNAinterference 双链 RNA介导的遗传干涉的机制是 1998年发现的，它通过双链 RNA的介导特异性地降解相应序 列的mRNA，从而导致转录后水平的基因沉默。到目前为止在真菌、拟南芥、线虫、锥虫、水蝎、涡虫、果 蝇、斑马鱼、小鼠等真核生物中都发现存在这种基因沉默机制。基因沉默是生物体基因表达调控的一种 重要机制，具有重要生物学功能，如RNA干涉对于抵抗病毒入侵、抑制转座子活动等具有重要作用，对 于生物体的发育和基因调控可能也有重要作用…I。 我们在拟南芥芯片杂交分析中发现了一个低磷条件下诱导的推测的钙调蛋 白基因类基因 (Atts76650)，命名为A iC枷 (Arabd／ops／sPi—starvationniducedCaM)，本文以该基因作为研究对象，通过 基因沉默的方法，让该基因不表达，获得AtPsiCaM基因的转基因干涉植株，以期对该基因进行进一步的 功能研究。 1 材料和方法 1．1 实验材料 拟南芥：哥伦比亚型(cDZ ) 菌株：大肠杆菌DH5a，农杆菌菌株EHA105。 质粒pCaMBIA1301和pCaMBIA2301、pUC—T载体、pbs—in载体 收稿 日期：2004．一11—08 作者简介：段瑞君(1974一)，男。河南修武人，讲师，硕士。研究方向：tit物生物化学与分子生物学。 维普资讯 维普资讯 36